【摘 要】
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本文通过定点突变的方法使IL-3的第116位的赖氨酸分别被缬氨酸和色氨酸取代，获得了hIL-3的突变体hIL-3K116V和hIL-3K116W。优化了其在大肠杆菌BL21CodonPlus(DE3)-RIL中的
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本文通过定点突变的方法使IL-3的第116位的赖氨酸分别被缬氨酸和色氨酸取代，获得了hIL-3的突变体hIL-3K116V和hIL-3K116W。优化了其在大肠杆菌BL21CodonPlus(DE3)-RIL中的实验室表达条件，表达的目的蛋白占菌体总蛋白的40﹪以上，并且主要以包涵体的形式存在，亲和层析后纯度达90﹪以上。透析复性后获得有活性的目的蛋白，促TF-1细胞增殖分析的结果表明，hIL-3K116V的活性是hIL-3的5倍，hIL-3K116W活性也有所增加，特别是在低浓度的情况下。这些结果都证明第116位的赖氨酸残基对于hIL-3的活性十分重要，突变体hIL-3K1l6V也有望成为高活性的hIL-3的替代品。
另外，研究还构建了原核细胞表达载体pT7450-K116V，在大肠杆菌中得到表达，研究了hIL-3K116V的离子交换纯化条件，为实现该突变体的大规模表达纯化和临床应用提供了条件。
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