金霉素降解菌株特性及代谢产物研究

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金霉素属于四环素类抗生素,广泛应用于畜禽疾病的预防和治疗中。金霉素自然条件下降解较慢,在环境中易诱导耐药菌的产生,对环境安全和人类健康构成威胁。目前,金霉素残留问题已引起了国内外普遍关注。金霉素生物降解具有环保、低耗、高效等优点,具有广阔的市场发展前景,而目前国内外对于生物降解方面研究报道很少。为此,本研究将选择自主筛选的3株降解金霉素菌株,对其降解特性以及金霉素生物降解产物等进行了研究,为金霉素的生物降解和金霉素废弃物的处理提供科学依据。1、对金霉素测定方法进行研究,得到药渣经EDTA-Mcllvaine缓冲液辅助超生波提取后采用梯度洗脱,金霉素与其它物质能够完全分离。在1.0-1500.0mg/L浓度范围内,金霉素标准曲线R2为0.9991,检出限为3.00ug/kg,加标回收率介于94%-102%之间,相对标准偏差为2.02%-7.63%。2、菌株降解特性研究表明,菌株LJ245在100mgL的金霉素环境中生长和降解效率最优。LJ302菌株在300mg/L的金霉素中生长和降解效率最优。菌株LJ245和LJ302在pH为6.00,温度为28-30℃,碳、氮源分别为蔗糖和蛋白胨,麦芽糖和蛋白胨时,其生长最优。菌株LJ245和LJ302选择葡萄糖和氯化铵,甘油和硝酸钾分别作为碳、氮源,金霉素降解率最高。苍白杆菌SW-5耐受金霉素范围为200-600mg/L,在pH为6.00,温度为37℃,以葡萄糖和甘油作为碳源,KNO3等无机氮作为氮源时,菌株SW-5的生长最好。3、通过对不同水环境中金霉素及其同分异构体间的变化特征研究发现,在相同温度条件下,pH在3.0-11.0范围内,随着pH值增加,金霉素半衰期呈明显缩短趋势,酸性条件多转为差向金霉素,碱性条件下多转为异金霉素;在相同pH条件下,温度在20℃-121℃范围内,随着温度升高,金霉素半衰期呈现降低趋势,金霉素同分异构体变化呈总体下降趋势。4、选择大肠杆菌和藤黄微球菌作为指示菌,对金霉素、差向金霉素、异金霉素、四环素及差向四环素5种物质的生物毒性比较研究显示,金霉素、差向金霉素和四环素对大肠杆菌的毒性最大。金霉素对藤黄微球菌毒性最强,其次为差向金霉素和四环素,由此可知金霉素与其同分异构体对微生物的毒性不同。5、生物降解药渣中金霉素生成脱氯脱水金霉素(m/z=427)、脱氯脱水脱甲基脱二甲胺金霉素(m/z=369)同时得到m/z=274的物质,推测为一种开环物质。
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