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APN作为多种Ⅰ群冠状病毒的功能性受体,在冠状病毒感染细胞中发挥着重要作用。受体利用在冠状病毒几个群及属之间一致性很少,冠状病毒似乎可以采用多种策略便于与宿主受体结合从而与靶细胞发生相互作用。作为冠状病毒的IBV进入细胞也必然利用受体, IBV的功能性受体是仅存在于鸡体内的一种特异性蛋白,鉴于多种Ⅰ群冠状病毒使用APN作为自身受体,鸡APN(氨肽酶N)作为可能受体与鸡传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus,IBV)感染密切相关,使IBV感染普遍存在于全身各脏器。鉴于APN可能作为IBV受体这一假设,本研究针对以下几个问题开展工作:APN的酶活性与IBV的组织嗜性之间是否存在相关性?APN的自然分布与IBV的组织嗜性之间是否存在一定的规律?APN的动态分布与酶活性高低与IBV的感染先后顺序及持续感染是否存在一定的联系?APN能否帮助IBV感染异源细胞?本实验主要具体的研究内容、方法和结果如下:1.为研究IBV组织嗜性与APN的分布之间的关系需要了解APN的酶活性分布及各组织m RNA表达量的差异。本实验对APN酶活性及m RNA表达量分别进行了定量研究。采用分光光度法测定不同日龄雏鸡各主要组织器官等量总蛋白与APN特异底物leu-pna相同反应条件反应后于410nm处吸光度的改变,以这一改变表示各组织部位蛋白中APN酶活性差异,结果表明IBV的组织嗜性与APN酶活性存在一定的相关性,但规律性不强;采用荧光定量PCR的方法测定不同日龄雏鸡主要组织器官中APN的m RNA表达量,结果表明IBV的组织嗜性与APN的自然分布存在明显的正相关性,幼龄家禽APN表达量高于成熟家禽;IBV易于侵蚀的肾脏、呼吸道、肺脏等含量相对稳定,肠道APN含量后期增高,显示肠道APN的后期表达与IBV的持续感染存在相关性,符合了APN可能作为IBV感染相关受体的假设;2.为进一步研究鸡APN的性质,本实验成功从鸡胚肾脏中克隆到全长鸡APN基因,与公布序列同源性高达99.48%,构建了原核表达重组载体,使鸡APN在体外得到了高效表达,原核表达得到的蛋白为包涵体形式,可用于进一步研究APN在IBV感染中的作用;3.为探索鸡APN在启动IBV感染细胞是否存在作用,本研究成功构建了携带绿色荧光蛋白的APN真核表达重组载体并对BHK-21细胞进行转染,使得APN在BHK-21细胞上得到高效表达,转染APN后IBV对BHK-21变得易感,病毒大量繁殖,而且随着代次的增加感染出现病变时间缩短,并在BHK-21上出现了IBV典型病变。表明鸡APN可以作为IBV的功能性受体。