一种向植物布尼亚病毒提供帽子供体的实验体系的建立和应用

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:song656334704
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番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt tospovirus,TSWV)和水稻条纹病毒(Rice stripe tenuivirus,RSV)是两种重要的植物布尼亚病毒。如动物布尼亚病毒一样,TSWV和RSV在合成m RNA时先从帽子结构下游10-20个碱基处切割寄主m RNA,然后以5’端切割产物(帽子序列)作为自身的转录引物,使每条病毒m RNA都含一小段来源于寄主m RNA的帽子序列,这一过程称为抓帽。对于植物布尼亚病毒如何选择和利用帽子序列,研究者已经提出多种模型,但由于缺乏便捷的实验体系,这些模型往往缺乏实验性的证据,或者仅在少数病毒进行过有限的验证。农杆菌浸润法被广泛用于在植物叶片表达外源m RNA。本研究发现,在TSWV或RSV侵染的本氏烟叶片注射含p CHF3载体的农杆菌后,两种病毒都可以从p CHF3表达的GFP m RNA抓帽。以此为基础,本研究构建了11个表达不同GFP m RNA的载体,对TSWV和RSV如何选择和利用帽子序列进行了初步的比较研究,取得的主要结果如下:(1)TSWV和RSV都倾向于选择与其基因组链3’末端互补的帽子序列,表明两种病毒在抓帽过程中都遵循“碱基配对”原则;(2)TSWV倾向于选择13-15 nt的帽子序列,而RSV倾向于选择11-13 nt的帽子序列,表明两种病毒对帽子序列长度的偏好性不同;(3)在使用小于一定长度的帽子序列时,TSWV和RSV都高频使用引发与重配机制,但TSWV使用该机制的频率不如RSV高;(4)同TSWV一样,RSV对能与其基因组进行多碱基配对的帽子序列具有偏好性。本研究进一步验证了相关研究者之前提出的一些模型,首次明确表明不同布尼亚病毒对帽子序列长度的偏好性存在差异,并首次发现TSWV也像RSV一样在帽子序列较短时频繁使用引发与重配机制。更为重要的是,本研究建立了一种可以便捷地向TSWV和RSV提供特定m RNA(供其抓帽)的实验体系,这为进一步研究植物布尼亚病毒的抓帽机制奠定了重要基础。
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