目的:研究AE2蛋白在高糖诱导的脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡中的作用并初步探讨其可能的作用机制。方法:将人脐静脉内皮细胞株CRL-2480,均匀接种在六孔培养板上,随机分为六个组:正常对照(Control)组、低糖(LG,17.8 mM)组、高糖(HG,35.6 mM)组、甘露醇(MNT,35.6 mM)组、Control+SITS组以及高糖+SITS组。各组进行以下指标观察:①MTT法检测细胞存活率;②RT-PCR检测HUVECs中AE2 mRNA的表达;③Western Blotting检测HUVECs中AE2蛋白;④Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡的程度;⑤SOD试剂盒测定细胞内SOD的活性;⑥DCFH-DA/PI法检测细胞内活性氧(ROS)的含量;⑦Rhodamine123/PI法检测HUVECs中线粒体膜电位变化。结果:①细胞存活率:HG (38.3±3.6%)组、LG组(55.1±10.1%)与Control (90.2±9.3%)组比较,有显著性差异(P <0.01);HG (38.3±3.6%)组较HG+SITS (86.4±7.2%)组降低47.9%(P <0.01);MNT组(85.1±10.1%)、Control+SITS(88.6±6.2%)组分别与Control组比较均无显著性差异(P >0.05)。②AE2 mRNA的表达:AE2各组样本均由对应的β-actin条带的扫描值标化。AE2 mRNA在正常HUVECs中呈基础性表达;Control组、LG组、HG组、MNT组AE2 mRNA表达量分别为0.33±0.03、0.60±0.03、0.79±0.03、0.34±0.04。HG组、LG组内皮细胞较Control组AE2 mRNA转录均显著上调(P <0.01);HG组较LG组也明显升高(P <0.01);MNT组较Control组无明显差异(P >0.05)。③AE2蛋白的表达:AE2蛋白各组样本均由对应的β-actin蛋白条带的扫描值标化。AE2蛋白在正常HUVECs中呈基础性表达;Control组、LG组、HG组、MNT组AE2蛋白表达量分别为0.25±0.04、0.30±0.04、0.36±0.05、0.26±0.04。HG组内皮细胞较Control组、LG组AE2蛋白表达显著增加(P <0.01); LG组较Control组AE2蛋白表达也有明显改变(P <0.05); MNT组与Control组相比无明显差异(P >0.05)。④细胞凋亡程度:细胞的凋亡程度通过Annexin V/PI双染色进行分析。与Control(3.6±0.4%)组、LG(17.6±2.5%)组、HG+SITS (18.4±2.3%)相比,HG组凋亡程度明显增加(P <0.01),达到45.5%;LG组较Control组也有明显增加(P <0.01); Control+SITS (3.5±0.4%)组,MNT(4.3±0.5%)组与Control组比,并无明显差异(P >0.05)。⑤细胞内SOD的活性:Control组、LG组、HG组、HG+SITS组、Control+SITS组、MNT组SOD的活性值分别为(60.2±8.5 U/ml),(45.4±7.7 U/ml),(35.5±3.2 U/ml),(50.6±4.2 U/ml),(58.0±8.2 U/ml),(57.1±9.1 U/ml)。HG组较Control组、LG、HG+SITS组均有显著性差异(P <0.01);LG组较Control组也有明显变化(P <0.05);Control+SITS组、MNT组分别与Control组比较均无显著性差异(P >0.05)。⑥细胞内ROS的含量:细胞内的ROS生成使用过氧化物敏感性的荧光探针DCFH-DA通过流式细胞计量术来检测。Control组、LG组、HG组、HG+SITS组、Control+SITS组、MNT组细胞内ROS的平均荧光强度分别为:22.6±2.5,58.3±3.2,110.4±8.6,35.0±3.6,27.5±3.6,21.8±2.1。HG组较其他各组的细胞内ROS含量明显增加(P <0.01),且LG组与Control组相比较也有显著性差异(P <0.01);Control+SITS组和MNT组细胞内ROS含量较Control组均无显著性差异(P >0.05)。⑦细胞内线粒体膜电位的变化:各组细胞内的线粒体膜电位通过罗丹明123和PI染色后的凋亡细胞百分率来表示,LG和HG组均较Control组明显升高(P <0.01);而HG+SITS组与HG组相比明显降低(P <0.01);Control+SITS组、MNT组较Control组均无明显差异(P >0.05)。结论:高糖上调AE2蛋白的表达诱导内皮细胞凋亡;高糖诱导内皮细胞凋亡可能是AE2/ROS依赖性的。