产志贺毒素大肠杆菌是一种常见的可以引起人和动物腹泻、出血性肠炎和溶血尿毒综合征的一类食源性人兽共患病原菌,其中以血清型0157：H7最具有代表性。0157：H7大肠杆菌主要依靠它产生的志贺样毒素、溶血素和对上皮细胞的粘附力对人体产生损害。另外,大肠杆菌的低剂量感染的一个重要原因是具有很强的耐酸性,当大肠杆菌进入pH值为1.0-3.0的胃液或其他酸性环境中时,它的一些特定的基因会被诱导表达,促进其对酸性环境的适应能力,从而大大提高细菌的存活率。当人食用污染了大肠杆菌的水和食品(特别是一些酸性或发酵食品),容易导致大肠杆菌病的发生,为此大肠杆菌的耐酸性的研究逐渐引起了人们的重视。谷氨酸耐酸系统在大肠杆菌酸应激过程中起到主要的调节作用,系统内的耐酸基因相互调节共同发挥耐酸效应。为进一步验证谷氨酸系统中不同耐酸基因之间的相互作用关系,本研究对这谷氨酸系统中4个重要的耐酸基因gadE, hdeA, hdeB,hdeD进行了缺失,利用Red重组酶系统构建MG1655gadE、hdeBAD基因缺失株及其互补株。采用RT-PCR的方法对野生株、缺失株、互补株的基因转录进行了分析,并通过活菌计数测定细菌在不同酸性条件下的存活率。结果显示,gadE基因的缺失引起了其他耐酸基因hdeA、hdeD、gadA、gadB的表达量的下降,且互补株中这几个基因的相对表达率高于缺失株。菌株在酸性环境中的存活率也有明显下降。提示gadE可以通过调控其他耐酸基因的表达水平影响大肠杆菌的耐酸能力。而hdeBAD基因缺失对gadE基因的表达量没有影响,说明这种调控作用并不是相互的。根据实验室已有的研究结果提示Stx噬菌体的溶原可能影响宿主菌的耐酸性,本研究通过Stx噬菌体的溶原对耐酸基因的影响,为进一步诠释噬菌体溶原对宿主菌的影响、以及产志贺毒素大肠杆菌高致病性机制提供理论依据。已有的研究表明Stx噬菌体溶原大肠杆菌后,不仅可以使细菌获得产Stx的能力,通过基因芯片表达谱分析发现,溶原菌的谷氨酸耐酸性系统中的gadE、hdeA等耐酸基因表达量也有所上调,提示噬菌体的溶原可能对大肠杆菌的耐酸性产生影响,为进一步验证Stx噬菌体对宿主菌耐酸性的影响,诠释噬菌体溶原对宿主菌生物学特性的作用。本研究从噬菌体对大肠杆菌的溶原感染入手,将Stx2噬菌体ΦMin27感染大肠杆菌MG1655及MG1655的gadE基因的突变株,获得稳定的溶原株后,通过活菌计数比较溶原前后的野生株和突变株体外耐酸能力的变化,并通过RT-PCR比较溶原前后耐酸基因的相对表达水平的改变,进而阐述Stx噬菌体的溶原对宿主菌生物特性的影响。结果显示,Stx2噬菌体的溶原使大肠杆菌谷氨酸耐酸系统的gadE基因的上调,但对hdeA、hdeB、hdeD的表达量没有显著影响,MG1655的溶原株在酸性环境中的存活率增强。且gadE基因缺失的溶原株的耐酸能力几乎没有差异,提示Stx2噬菌体的溶原能影响大肠杆菌的耐酸能力,并推测出这种调节作用是通过对gadE表达的调控来实现的,但这种调控机制还需要进一步的探索。