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乙型肝炎病毒(HBV)基因组主要包括四个开放读码框架(ORF),分别为S区、C区、P区和X区,其中C区编码HBcAg及HBeAg,其调控序列位于前C区及C基因启动子(CP),是HBV变异研究的热点。现已发现,前C区A1896点突变(nt1896G→A)以及CP中的T1762(nt1762A→T)和A1764(nt1764G→A)联合点突变均可造成HBeAg阴性的HBV感染,但尚未肯定是否与临床病情相关;CP区另两处点突变T1653(nt1653C→T)和C1753(nt1753T→C)已在重型肝炎患者体内检测到,但其出现规律尚未明了。上述位点发生变异的临床意义均有待更多的研究资料来说明,包括不同地区、不同群体之间的相互对比。此外,由于HBV前C/CP区存在着众多的调节序列,有必要深入研究已发现的变异位点的存在形式及其相互关系。 本研究收集浙江省慢性乙型肝炎(20例)和慢性重型乙型肝炎(25例)患者血清,采用PCR反应直接测序法,测定HBV前C/CP区核苷酸序列(nt1606-2016),确认其中的变异“热点”并寻找“热点”外的变异,同时分析各变异点之间的相互关系,以探明HBV前C/CP基因区变异的临床意义。 一、HBV前C/CP区主要变异位点 前C区A1896变异株的检出率为53.3%(24/45),其nt1858均为T,提示前C变异株可能存在基因型依赖性,A1896在浙江HBV分离株中的大量检出是因为这些毒株具有T1858,A1896与T1858的共价结合保证了HBV复制所需的包装信号ε干-袢结构的形成。 CP区的主要变异位点是T‘’‘’和A”’‘,该两处点突变相伴出现于60叭27付5)病例, 而 CP区另两处点突变丫‘”和 C””相互之间却无共存,推测上述现象的产生与重叠于 CP区的 HBV X基因有关,需确定是 X基因的一种反式调节活性还是对宿主免疫压力 的一种逃逸。 二、馒性乙肝与fat乙肝患者HBy前C/CP区主烈轿啦点比较 前C区 A’一点突变在慢性乙肝组与重型乙肝组的检出率分别为 40%和 64%,差异 无显著性仔川.05X 提示 A‘删点突变的发生与炎症活动度无关,并非是重型乙肝的 特征性变异。 CP区T””-A”’‘双突变合并前C区A””点突变均出现在重型乙肝组(44%),T””/C‘”’ 单一点突变亦仅见于重型乙肝患者(72%),而且均伴有 T””-A‘’“双重变异,提示 HBV CP变异与炎症活动度相关,T’‘’-A‘’“突变株如出现 A‘’”或 T“”/C‘’“单一点突变是否 有可能改变宿主的免疫应答继而引发重型肝炎有待深人研究。 结 论 1.浙江省HBV分离株前C区主要变异位点为 A‘”’;C启动于主要变异位点包括T”“。 C‘”‘T‘”‘和 A”“ 2.HBV前C区A‘’‘’点突变的出现主要取决于各地流行毒株的基因类型(是否具有 T‘’‘’),其单独出现可能与临床病情无关。 3.HBV CP区较易发生多位点变异,其中丫”’与 A‘”‘相伴出现,T‘’‘’与 C”‘’相互排斥。 4.HBV CP区变异可能与炎症活动度相关。T””-A‘’“双突变伴发 A‘”’或丫‘”/C”‘单一 点突变出现于重型肝炎患者。