中药复方银屑1号对HaCat细胞的炎症调控及对NE、trappin-2的影响

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目的:银屑病为皮肤科常见的慢性炎症性疾病,其主要病理特征是角质形成细胞(keratinocytes, KC)的过度增殖及中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophils, PMNs)的聚集。PMNs合成、储存的中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase, NE)成为目前研究的焦点问题。NE具有加速炎症反应、促进细胞增殖、导致组织损伤等作用,对银屑病的发生发展起到关键性的作用。trappin-2是NE的内源性抑制剂,常表达于某些炎症性皮肤病及皮肤肿瘤中,通过降解NE来抑制NE活性。主要由KC分泌,亦是KC分化的标志性蛋白。目前,关于NE/trappin-2平衡失调的致病学说已经得到广泛的认可。人永生化角质细胞(HaCat细胞)与KC的基本特性极其相似,已广泛应用于银屑病的研究中。本文应用体外培养的经肿瘤坏死因子-α (Tumor necrosis factor, TNF-α)刺激的HaCat细胞模拟银屑病的病理特征,通过不同浓度中药复方银屑1号的含药血清作用于HaCat细胞,观察其对NE、trappin-2及相关细胞因子(IL-6、IL-8、ICAM-1等)表达的影响,以探讨NE、trappin-2在银屑病发病中的作用机制,阐明中药复方作用于银屑病的内在物质基础,为中药复方治疗银屑病新的作用靶点提供更有利的科学依据。方法:实验设置不同浓度的中药复方组、雷公藤阳性对照组及生理盐水组,并制备各组含药血清。将体外培养的HaCat细胞接种于96孔板内,待细胞铺满孔底时,将各组的含药血清加于培养板中;各孔均加入同量的TNF-α刺激进行培养,分别在Oh、12h、24h、48h不同的时间点,采用ELISA法检测NE、trappin-2、 IL-6、IL-8水平,Western-blot法检测ICAM-1的表达水平。结果:1、NE实验结果显示:12h时银屑1号原液组与银屑1号1/2浓度组比较有统计学意义(P<0.05);银屑1号1/2浓度组各时间点比较,0h的NE浓度最高,12h最低,12h与0h、24h、48h相比均有统计意义(P<0.05);2、trappin-2实验结果示:银屑1/2浓度组、银屑1号1/4浓度组与其他组比较有统计学意义(P<0.05);银屑1号1/4浓度组组内Oh、12h、24h、48h组间两两比较有统计学意义(P<0.05),且0h时trappin-2浓度最低,48h时trappin-2浓度最高;3、IL-6实验结果示:银屑1号1/4浓度组与其他组比较有统计学意义(P<0.05),且组内0h与12h、48h有统计学意义(P<0.05);4、IL-8实验结果示:银屑1号1/4浓度组与其他组比较有统计学意义(P<0.05),且组内12h与0h、24h有统计学意义(P<0.05)5、WB实验结果显示:各组间均无统计学意义(P>0.05)。结论:1、中药复方作用于NE、trappin-2并不是随着浓度的变化而变化;中药复方银屑1/2浓度组12h时抑制NE的表达作用最强,并随着时间的推移及浓度的稀释,作用逐渐减弱;中药银屑1/4浓度组24h时抑制trappin-2的表达作用最强,并随着时间的推移作用逐渐减弱;2、中药复方对于IL-6、IL-8的作用与中药复方的浓度无相关性;中药银屑1/4浓度组24h时抑制IL-6及IL-8的表达作用最强,并随着时间的推移作用逐渐减弱;综上所述,中药复方银屑1号可以降低NE、trapping-2、IL-6、IL-8的表达水平,并可能是通过抑制NE、trappin-2、IL-6、IL-8的表达,从而抑制炎症反应,达到治疗银屑病的目的。显示了中药复方的多环节、多靶点效应,为中药复方治疗银屑病的作用机制提供新的科学依据。
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