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原发性肝癌(PHC)是我国常见的恶性肿瘤之一,它的早期发现及诊断对患者的治疗和预后具有重要意义,尤其对于有肝硬化基础的患者。目前临床上均倾向于血清学诊断作为PHC首选的普查手段。然而,不同的肝癌血清肿瘤标志物在肝硬化人群中发现和诊断PHC的价值却鲜见报道。本研究前半部分工作旨在观察比较AFP、AFP-L3%、GP73和IL-6在肝硬化和肝硬化合并PHC患者血清中的表达,探讨其在肝硬化人群中发现和诊断PHC的作用,试图发现在肝硬化人群中最适合用于诊断PHC的血清学指标。本部分设计为前瞻性平行对照研究,自2014年1月起,收集就诊我院的肝硬化和肝硬化合并肝癌的初治患者,截止2015年12月,共收集了肝硬化合并肝癌的初治患者521例,随机选取同期就诊我院并确诊为肝硬化的初治患者274例。所有入选患者均在确诊后,并在进一步治疗前采集静脉血检测血清AFP、AFP-L3、GP73和IL-6含量,并计算AFP-L3%(AFP-L3/AFP),同期采集静脉血化验肝功能、嗜肝病毒定量等相关指标,详细收集患者一般资料、检验、检查结果等进行分析。研究结果显示:(1)肝硬化合并肝癌组血清AFP(Z=10.77,P<0.05)、IL-6(Z=15.62,P<0.05)表达水平均较肝硬化组高,血清GP73(Z=2.45,P<0.05)表达水平较肝硬化组低,差异均具有统计学意义;两组间血清AFP-L3%差异并无明显统计学意义(Z=1.92,P=0.055)。为进一步明确疾病进展过程中各血清肿瘤标志物变化情况,我们将组别细分为肝硬化代偿期组、肝硬化失代偿期组及肝硬化合并早期肝癌组、肝硬化合并中晚期肝癌组,发现血清AFP(Z=11.67,P<0.05)、AFP-L3%(Z=5.56,P<0.05)及IL-6(Z=20.64,P<0.05)表达水平随疾病病程进展而逐渐增高,组间差异均具有统计学意义;而GP73表达水平在肝硬化失代偿期组最高,肝硬化合并中晚期肝癌组次之,肝硬化代偿期组最低,且组间差异具有统计学意义(Z=9.48,P<0.05)。(2)AFP表达水平与肝功能Child-Pugh分级呈正相关,组间差异具有统计学意义(P<0.05);AFP-L3%水平与患者一般情况、肝功能等因素均无明显相关性(P>0.05);GP73表达水平高低与是否合并腹膜炎、电解质紊乱、贫血、低蛋白血症、腹水、脾大、食管胃静脉曲张、门脉高压等肝硬化并发症及肝功能Child-Pugh分级成正相关(P<0.05),提示GP73与肝硬化疾病严重程度及并发症程度成正相关;IL-6表达水平与是否合并腹膜炎、胸腹水及肝功能Child-Pugh分级成正相关(P<0.05)。病毒性肝炎肝硬化及合并肝癌患者血清AFP、GP73和IL-6表达水平均与病毒含量相关,病毒含量增高,其表达水平均增高;而AFP-L3%与其无相关性。(3)在肝硬化合并肝癌患者中,血清AFP、AFP-L3%、GP73和IL-6表达水平与肿瘤病灶大小、肿瘤病灶数目及是否合并其他脏器转移成正相关,随肿瘤严重程度加重其表达水平逐渐增高,组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。血清AFP、AFP-L3%及IL-6表达水平还与是否有局部血管侵犯成正相关,而GP73与其无明显相关性;IL-6表达水平与是否合并淋巴结转移成正相关;GP73表达水平在BCLC分期B期的患者中最高,C期次之,而在BCLC分期为A期的患者中最低。(4)在肝硬化人群中发现和诊断肝癌的敏感性IL-6最高(99.8%),后依次为GP73(75.8%)、AFP(45.7%)、AFP-L3%(28.2%);特异性AFP-L3%最高(97.4%),后依次为AFP(87.2%)、IL-6(35.4%)、GP73(23.4%)。在肝硬化人群中诊断早期肝癌的敏感性IL-6最高(98.6%),特异性AFP-L3%最高(97.4%)。相较临床常用的AFP,IL-6和GP73的敏感性更高,但特异性过低,而AFP-L3%的特异性更高,敏感性稍逊。各血清肿瘤标志物联合应用可能提高肝硬化人群中肝癌及早期肝癌的诊断效能。综上,我们前半部分研究发现AFP、AFP-L3%可有效用于肝硬化人群中肝癌的诊断,AFP-L3%更具优势;GP73和IL-6不能单独用于肝硬化人群肝癌的诊断,但可尝试用于肝癌的早期预警;各血清肿瘤标志物联合应用可提高肝癌诊断敏感性及特异性。GP73可尝试用于评估肝硬化失代偿期病情的严重程度。本研究另一部分工作是进行了cGAMP快速检测方法的尝试。本研究前半部分结果显示IL-6在肝硬化人群中诊断肝癌的敏感性高,可尝试用于肝癌的早期预警,但其特异性差,而在肿瘤的发展过程中IL-6受NF-κB调控,NF-κB又受到cGAS-STING通路影响,且cGAS-STING通路活性与炎症相关性肿瘤发生发展相关,因此可以尝试通过评估cGAS-STING通路激活水平来辅助IL-6在肝硬化人群中诊断肝癌,提高其特异性,且该通路激活水平亦可尝试作为早期肝癌的预测指标。c GAMP含量可表征cGAS-STING通路激活水平,因此我们尝试建立快速检测cGAMP含量的方法,用以快速评价cGAS-STING通路激活水平,为后续研究进行技术储备。首先我们利用不同浓度的HT-DNA刺激肝癌细胞(BEL-7402细胞),采用Real-Time PCR测定IFNβ的mRNA水平,确定了2μg/ml为后续实验使用浓度。在后续实验中,检测时间点设置为2小时和4小时,设置空白对照组,HT-DNA刺激肝癌细胞,采取LC-MS/MS测定细胞上清中的cGAMP含量,同时采用Real-Time PCR和Western bolt测定cGAS-STING通路活性。实验结果显示随着HT-DNA刺激时间的延长,细胞内cGAMP含量的显著增加,IFNβ的mRNA表达水平及蛋白IRF3的磷酸化水平明显增加,提示cGAMP含量可以表征cGAS-STING通路活性,且LC-MS/MS为快速检测肝癌细胞cGAMP含量的有效方法。