应用于眼睛表面的药物治疗主要有两个目的:治疗眼表疾病,如结膜炎、眼睑炎、干性角膜炎;或者是穿过角膜对眼球内的疾病进行治疗,如青光眼、眼色素层炎。大多数的眼病采取局部的溶液剂型治疗,如滴眼剂。当前市场上这类传统的剂型约有90%左右是易被人们接受的[1]。局部的眼部给药存在的主要问题是由于引流和泪液稀释冲洗导致角膜前的快速的、大量的损失。局部给予眼用药物溶液后,药物首先与泪液混合。因为眼睛能恒定地产生泪液(0.5-2.2ul/min),药物与眼组织的接触时间相对地来说比较短(1-2min),大约有一半的药物流进上面的小管,而另一半则流进下面的小管进入泪囊,泪囊开口于鼻泪管,在眨眼的时候流泪引流进入鼻泪管,使传统剂型的药物迅速消除。药物经结膜吸收以及被引流后经由鼻泪管经鼻吸收都是我们所不希望的。为了增加生物利用度,延长药物治疗作用,眼用药物剂型在设计上应该包括两个范畴:首先应用给药体系,保证眼用药物的控、缓释放。第二,提高药物的角膜吸收,减小药物的角膜前损失[5]。目的:本文以葛根素为模型药物,从研究提高药物角膜前滞留时间入手,制备具有适宜相转变温度的温度敏感及粘膜附着型眼用即位凝胶。应用流变学方法表征凝胶过程,研究凝胶中药物的释放规律,并对温度敏感及粘膜附着型即位凝胶眼部应用后的房水和泪液药物动力学及生物利用度进行研究。方法:(1)方法学考察:根据药典方法,确定了葛根素的测定方法,并对精密度和稳定性等方面进行了考察。(2)处方筛选:在文献基础上,确定以泊洛沙姆F-127和188、透明质酸钠、卡波姆1342为主要基质,以经人工泪液稀释前后的胶凝温度为指标对处方进行筛选,并以泊洛沙姆F-127、188、卡波姆1342的用量、pH为考察因素,每个因素设3个水平,按L9(4)3正交表安排实验,得到最佳处方,同时保留单因素考察时比较理想的处方进行以下的实验。(3)体外释放研究:采用无膜溶蚀法、离体角膜透皮扩散法、溶出仪法,以人工泪液为溶出介质,温度34.5±1℃,在规定的时间点取样,累积释放度分别以Highchi、零级和一级方程进行拟合,分别考察凝胶的溶蚀及药物的释放动力学,对药物的释放机理进行研究。(4)稳定性实验:对实验得出的最佳处方进行强光照射、加速实验,观察凝胶的外观,测定含量,考察稳定性。(5)家兔眼部刺激性和毒性考察:刺激性试验:以生理盐水为对照组,采用同体左右侧自身对比法,在规定时间内对单次和多次给药对兔眼的刺激性症状进行检查,并对记录结果进行评价。毒性试验:健康新西兰白兔6只,随机分成两组,一组右眼给予葛根素即位凝胶,左眼给予生理盐水作对照;另一组右眼给予葛根素滴眼剂,左眼给予生理盐水作对照。实验结束后,摘除眼球,做组织切片,电镜检查。(6)体内药代动力学研究:以新西兰白兔作为实验动物,采用随机分组法进行分组,分别给予葛根素即位凝胶(实验组)和葛根素滴眼剂(对照组),不同时间的取样,高效液相色谱法测定泪液和房水中药物的含量,评价制剂的生物利用度。结果:(1)方法学考察:通过对精密度和稳定性等方面进行考察,确定药典方法为葛根素的含量测定方法。(2)处方筛选:以经人工泪液稀释前后的胶凝温度为评价指标,对处方进行筛选,得到温度敏感及粘膜附着型即位凝胶的最佳处方为:1%葛根素、27%泊洛沙姆F-127、0.8%泊洛沙姆188、0.1%透明质酸钠、0.1%卡波姆1342、pH6.5的磷酸盐缓冲液。制剂经人工泪液稀释前后的胶凝温度分别为:28±1℃和32±1℃。(3)体外释放研究:无膜溶蚀法、离体角膜透皮扩散法中各处方均符合零级方程,分别为:滴眼剂Q=0.0511t-1.1356,r=0.9988;凝胶处方1为Q=0.0343t-0.0814,r=0.9963;凝胶处方2为Q=0.0306t-0.0337,r=0.9964。无膜溶蚀法累积释放度及药物累积溶蚀度分别符合零级方程:Q=3010.6t+2567.6,r=0.9989和Q=0.429t-0.0559,r=0.9984。浆法溶出度法的累积释放度对时间曲线易更符合零级方程,为Q=1.2944t+6.0242,r=0.9896.(4)稳定性实验:制剂经强光照射、加速实验后,凝胶的外观无变化,含量稳定。日内精密度实验结果,泪液中葛根素的RSD为1.91%;房水中葛根素的RSD为2.82%。日间精密度结果,泪液中葛根素的RSD为1.68%;房水中葛根素的RSD为1.04%。(5)家兔眼部刺激性和毒性考察:刺激性试验:单次和多次给药刺激性试验结果表明对兔眼均无明显影响,双眼角膜透明,无混浊,虹膜纹理清晰,结膜无充血,无水肿,无分泌物。毒性试验:组织切片电镜检查结果显示,对照组和实验组无明显变化,组织结构完整,未见新生血管。(6)体内药代动力学研究:将测得的泪液中药物含量数据,用DAS药代动力学程序进程处理,得两制剂各项药代动力学参数,实验组中t1/2、AUC(0-∞)、AUC(0-t)值均明显高于对照组。结论:以上各项实验结果证明,实验所得眼用即位凝胶延长了葛根素在眼部的滞留时间,眼部刺激性小、耐受性好,无明显的眼部毒性反应。因此,葛根素眼用即位凝胶可明显延长药物在眼部的滞留时间,提高药物的生物利用度,展现出良好的眼部应用前景。