目的:构建PPARγ基因干扰腺病毒载体,为PPARγ基因在创伤性脑损伤中的功能研究及分子机制阐述奠定基础。方法:针对人源PPARγ基因设计4条siRNA,采用脂质体转染方法导入LN229细胞中,利用RT-PCR技术检测基因干扰效果,确定一条干扰效果最好的siRNA链用人工合成方式合成两端带Sfi酶切位点的shRNA,用Sfi酶切pAd-pSES-HUS质粒,用T4连接酶将shRNA连接到pAd-PSES-HUS质粒中,用Pmel和EcoRV双酶切重组质粒验证,将正确克隆的穿梭质粒用Pmel线性化后转到BJ5183与骨架质粒pAdeasy1同源重组成腺病毒质粒。Pacl酶切验证,将正确重组的质粒转入HEK293细胞中包装腺病毒,提取病毒颗粒测定滴度并感染LN229细胞,采用RT-PCR和Western-blot验证重组病毒干扰功能。结果:(1)成功构建pAd-pSES-HUS-PPARγ-shRNA穿梭质粒。(2)得到正确同源重组的腺病毒质粒。(3)成功制备具有干扰PPARγ基因的腺病毒颗粒。结论:本实验中成功构建具备干扰PPARγ基因的腺病毒颗粒,为PPARγ基因在炎症反应中功能研究奠定基础。