随着科学技术的发展与社会的进步，荧光比率技术已经成为荧光分析法中最重要的一项技术。荧光比率技术就是利用两个荧光发射峰的比率来对物质进行检测，同常规的荧光探针相比，该探针最明显的优势在于能够消除探针分子浓度以及探针分子所处的环境等因素带来的误差，同时该探针大大增加了响应的范围，能够提供更加精准的实验结果，给人们研究物质的性质带来了极大地方便。因此，荧光比率探针得到了极大地发展。双激发荧光比率探针就属于荧光比率探针中的一种，该探针要求在两个激发波长下荧光强度较强，且能很好地消除探针分子所处的环境所带来的误差。然而，现报道的小分子双激发荧光比率探针受制于诸多因素：如两个激发带之间的距离相距较短(20-70nm)，在一个激发波长下有很小的消光系数等缺点。这些缺点导致其在检测荧光比率强度时出现误差，为实验带来极大地不便。因此，我们希望设计一种新型的小分子双激发荧光比率探针，该探针的受体与供体之间激发带相距较远，同时，该探针在检测荧光比率强度时能够达到很高的要求，并能使信号强度在动力学范围内得到大幅度地提高。基于上述理由，我们基于FRET原理，设计合成了一种新型的香豆素-罗丹明荧光探针，该探针是第一个基于FRET原理的双激发荧光比率探针，该探针不仅荧光强度较强，而且两个激发带之间相距较远(激发波长相差>160nm)。在本文中，我们在此基础上，设计合成了一种检测pH值的荧光比率探针，能很好地受到空间与时间的控制，同时该荧光比率探针是一种安全可靠的比率模型。在本实验中，我们检测了外界pH值的变化对探针光谱性能的影响，使得以FRET原理为基础的分子策略可以应用于其他小分子双染料的能量转移体系，并根据这些双染料分子的特征设计出越来越多的荧光强度较强，激发带相距较远的双激发荧光比率探针。