目的：研究已证实异黄酮类化合物葛根素(puerarin)和大豆苷元(daidzein)对去卵巢大鼠具有明显的抗骨质疏松活性，并能够显著促进原代培养的大鼠成骨细胞增殖和分化。本室前期工作已证实葛根素能剂量依赖性促进大鼠成骨样细胞增殖，抑制体外破骨细胞性骨吸收功能并在体外促进小鼠长骨生长，但有关两种植物雌激素对人成骨细胞作用及作用机制的研究尚未见报道。本工作在文献报道和前期研究的基础上，以人成骨样细胞MG-63为研究模型，观察了葛根素和大豆苷元对人成骨细胞增殖、分化、存活、骨吸收调节因子如骨保护素(osteoprotegerin，OPG)/NF-κB激活受体配体(receptor activator of NF-κ13 ligand，RANKL)/NF-κB激活受体(receptor activator of NF-κB，RANK)系统、白介素-6(interleukin-6，IL-6)及其受体表达的作用，并对其可能的作用机制进行了初步探讨。　　 方法：　　 1.MTT法观察葛根素和大豆苷元对人成骨样细胞MG-63细胞的增殖能力的影响。　　 2.引用流式细胞术分析葛根素和大豆苷元对MG-63细胞细胞周期分布的影响。　　 3.磷酸苯二钠法检测碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性。　　 4.DAPI染色法观察葛根素和大豆苷元对顺铂诱导的细胞凋亡能力的影响。　　 5.逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)检测OPG、RANKL、IL-6及其受体（IL-6Rα、gp130）、ERα、ERβ、凋亡抑制蛋白Bcl-xL和X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein，XIAP) mRNA的表达水平。　　 6.酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immnosorbent assay，ELISA）法检测IL-6蛋白的表达水平和I型胶原酶的含量。　　 7.免疫印迹( Western Blot)技术检测OPG、RANKL、IL-6Rα、gp130、ERα和ERβ蛋白的表达水平。　　 8.应用雌激素受体(estrogen receptor, ER)阻断剂ICI182，780观察ER在葛根素和大豆苷元调节成骨细胞上述生物学性能中的作用。　　 9.采用RNA干扰技术(RNA interference，RNAi)分别对MG-63细胞的雌激素受体(estrogen receptor，ER)α和ERβ基因进行沉默，G418筛选出阳性单克隆，扩大培养后用Western Blot技术分别鉴定出ERα或ERβ高、中抑制表达克隆用于确定ER亚型在介导两种植物雌激素调节成骨细胞上述生物学性能中的作用。　　 10.应用Western Blot技术及特异性信号阻断剂PD98059(MEK1/2阻断剂)和Wortmannin(PI3K阻断剂)分析两种植物雌激素对成骨细胞发挥作用的相关信号通路。　　 结果：　　 1.葛根素和大豆苷元均可显著促进人成骨样MG-63细胞增殖，进一步研究发现两种植物雌激素可使G1期细胞比例减少，G2+S期细胞比例增加。　　 2.葛根素和大豆苷元可通过增加MG-63细胞中ALP活性和Ⅰ型胶原含量促进成骨细胞分化成熟。　　 3.葛根素和大豆苷元均可显著抑制由顺铂诱导的MG-63细胞发生凋亡，进一步研究发现两种植物雌激素可上调MG-63细胞中XIAP和Bcl-xL的mRNA表达。　　 4.葛根素和大豆苷元均显著上调MG-63细胞中OPG的mRNA及蛋白表达，同时下调RANKL的mRNA及蛋白水平。　　 5.ER阻断剂ICI182，780可部分阻断葛根素和大豆苷元对MG-63细胞的上述作用，其中葛根素对MG-63细胞的增殖和分化是由ERα和ERβ共同介导；大豆苷元对MG-63细胞的增殖是主要由ERα介导，其分化是由ERα和ERβ共同介导；两种植物雌激素对MG-63细胞IL-6产生主要是由ERα介导。　　 6.葛根素和大豆苷元均能上调成骨细胞中ERα和ERβ的mRNA和蛋白表达水平；大豆苷元对成骨细胞中两种ER亚型表达水平的作用强于葛根素。　　 7.葛根素能上调MG-63细胞中ERK和Akt的磷酸化表达水平；大豆苷元仅上调MG-63细胞中ERK的磷酸化水平，对成骨细胞中Akt的磷酸化表达水平作用不明显。　　 8.PD98059明显阻断葛根素和大豆苷元诱导的促成骨细胞增殖和分化作用；Wortmannin仅能阻断葛根素诱导的成骨细胞上述作用，对大豆苷元作用不明显。　　 9.Wortmannin可明显阻断两种植物雌激素对成骨细胞中IL-6的作用，PD98059对两种植物雌激素诱导成骨细胞的上述作用效果不明显。　　 结论：　　 1.葛根素、大豆苷元对人成骨细胞的增殖、分化及OPG表达有明显的促进作用，对RANKL和IL-6表达则有一定的抑制作用，此外两种植物雌激素还具有抗成骨细胞凋亡的功能。　　 2.葛根素和大豆苷元均可部分经由ER途径对成骨细胞发挥上述作用，其中葛根素对成骨细胞的增殖和分化是由ERα和ERβ共同介导；大豆苷元对成骨细胞的增殖是主要由ERα介导，其分化是由ERα,和ERβ共同介导；两种植物雌激素对成骨细胞IL-6产生主要是由ERα介导。此外，两种植物雌激素均能上调成骨细胞中ERα和ERβ的表达水平，其中大豆苷元的作用强于葛根素。　　 3.葛根素和大豆苷元对成骨细胞的促增殖作用可能与其调控细胞周期分布，即使G1期细胞比例减少，G2+S期细胞比例增加有关；对成骨细胞的抗凋亡作用可能与其上调抗凋亡制蛋白XIAP和Bcl-xL的表达有关。葛根素和大豆苷元对成骨细胞的促增殖、分化及抑制IL-6产生的作用可能至少通过活化Ras/MEK/ERK和PI3K/Akt通路来实现的。