脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤,恶性胶质瘤(WHO Ⅲ IV级),特别是胶质母细胞瘤预后极差。手术切除联合术后放化疗是目前治疗恶性胶质瘤的标准方案。尽管经过积极的治疗,患者的预后仍然较差。全面认识胶质瘤发生和进展的分子机制是寻找治疗靶点的关键所在。多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1 (Leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 1, LRIG1)是一种广泛的酪氨酸激酶受体(Receptor tyrosine kinase, RTK)抑制蛋白。正常情况下,生长因子与其受体结合后除了激活与细胞增殖相关的基因外,还诱导内源性负反馈调节因子LRIG1的表达,使信号通路激活的程度和时间受到严格的控制。在胶质瘤组织和细胞系中,LRIG1的表达普遍降低,而且WHO分级越高其降低程度越明显。体内外研究表明,过表达LRIG1对胶质瘤生长表现出明显的抑制效应。不仅如此,它还能够增强胶质瘤细胞对放化疗的敏感性。因此,在胶质瘤中LRIG1被认为是一个抑癌基因。但是,目前LRIG1表达下调的机制仍不清楚。微小RNA (microRNA)是一类由约22个核苷酸组成的非编码小分子RNA,它通过识别并结合靶mRNA 3’端非翻译区(3’untranslated region,3’UTR)的种子序列进而发挥下调靶基因表达的作用。大量的研究证实异常表达的miRNA在胶质瘤的发生和进展中发挥着至关重要的作用,而且生物信息学分析发现在LRIG1的3’UTR存在着多个miRNA的潜在作用位点。因此,本研究拟筛选出与LRIG1下调相关的miRNA,并尝试以miRNA为靶点重建内源性LRIG1的表达。在第一部分中,通过生物信息学分析并结合目前已有的文献报道初步筛选出4个在胶质瘤中发挥促癌效应且与LRIG1具有潜在作用的miRNA,即miR-19a、 miR-93、 miR-106b及miR-23a、进一步采用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测了人脑胶质瘤标本中上述4个：niRNA与LRIG1蛋白的表达,相关性分析表明miR-19a、 miR-23a与LRIG1蛋白的表达呈显著负相关,相关系数分别为-0.664(P=0.036)、-0.678(P=0.031)。以上结果提示胶质瘤中miR-19a、 miR-23a可能是LRIG1的转录后调控因子。第二部分中,采用反义寡核苷酸敲低人脑胶质瘤细胞系中miR-19a或miR-23a的表达。蛋白免疫印迹检测表明下调miR-19a后,U87和U251细胞中LRIG1表达明显增高；而下调miR-23a后,LRIG1的表达无明显改变。经荧光素酶报告实验证实LRIG1是miR-19a的直接作用靶点。为了进一步探讨LRIG1是否为miR-19a的功能靶点,本部分中进行了逆转实验。其结果提示干扰内源性LRIG1可以拮抗反义miR-19a的抗增殖作用和促凋亡效应。以上结果提示LRIG1在一定程度上介导了反义miR-19a对胶质瘤细胞的抑制作用。第三部分中,探讨反义miR-19a对裸鼠皮下移植瘤生长及内源性LRIG1表达的影响。皮下成瘤实验表明转染反义miR-19a后U87细胞在体内的生长受到明显抑制。接种后30d,反义miR-19a组皮下肿瘤的重量为1.44±0.23g,对照组为3.59±0.62g(P<0.05)。免疫组化分析表明反义miR-19a组皮下肿瘤中LRIG1阳性率较对照组明显增高,差异有统计学意义。以上结果提示反义miR-19a可以抑制U87细胞在体内的生长并可以提高内源性LRIG1的表达。综上所述,脑胶质瘤中过度表达的miR-19a是导致LRIG1蛋白下调的直接原因之一。体内外实验表明,下调miR-19a可以抑制U87细胞的生长,这可能与反义miR-19a促进内源性LRIG1表达有关。图注：正常情况下,LRIG1可以促进多种酪氨酸激酶受体发生泛素化并经蛋白溶酶体途径降解。脑胶质瘤中过度表达的miR-19a通过下调LRIG1蛋白从而破坏了酪氨酸激酶受体信号通路的负反馈环路,可能是促进胶质瘤的发生和发展的因素之一。(RTKs:酪氨酸激酶受体；LRIG1:多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1；RISC:RNA诱导的沉默复合体；CBL蛋白介导受体泛素化)