核酸适配体由于其具有分子量小、制备简单、高亲和力、高特异性等多种优点,逐渐替代抗体作为一种新型的生物识别元件,有望广泛应用于生命科学研究、检测分析和临床诊断等诸多领域。悬浮芯片技术是一种高通量、低背景的生物芯片技术,以荧光编码微球作为检测探针载体进行靶标物的快速灵敏检测。本研究将适配体与悬浮芯片技术相结合,以经典模式靶标物凝血酶作为检测目标,建立高亲和力和高特异性的适配体-悬浮芯片检测新技术。将氨基化的15mer的适配体(Thrombin binding aptamer 1,TBA1)修饰在磁性羧基化微球表面制备成探针微球,用于捕获溶液和血液样品中的凝血酶,生物素化的29mer的适配体(Thrombin binding aptamer 2,TBA2)作为报告探针与凝血酶结合,形成在微球上稳定的三明治夹心复合物,经过磁分离,将此复合物与溶液中未偶联靶标物分离。通过链霉亲和素-生物素的反应系统将荧光报告蛋白链霉亲和素-藻红蛋白(Strepavidin-phycoerythrin,SA-PE)连接到报告探针TBA2上,由悬浮芯片系统检测得到中位荧光强度值(Median Fluorescence Intensity,MFI)。通过优化,获得了最佳检测孵育条件和最佳偶联方案。在最佳检测条件和偶联方案下,建立了凝血酶检测标准曲线,检测范围18.37-554.31 nM(IC10-IC90)最低检出限为5.4 nM,说明检测方法具有较高的检测灵敏度和精确度。经过特异性测定实验证明了适配体-悬浮芯片检测技术检测凝血酶具有良好的特异性。对人血清中进行凝血酶加标回收率的测定,加标回收率在82.6-114.2%之间,相对标准偏差在10%以内,获得了满意的回收率效果,该检测技术有望成功应用于临床诊断的高通量样品检测。在建立适配体-悬浮芯片检测新技术的同时,对TBAs与凝血酶之间的分子间相互作用机制进行了初步探讨。利用微量热泳动技术(Microscale thermophoresis,MST)证实TBAs与凝血酶间具有很高的亲和力。MST信号反映了TBA1与凝血酶的偶联模式,表明TBA1可同时结合纤维蛋白原和肝素位点。本研究将新型识别元件——适配体与灵敏的悬浮芯片技术相结合,建立了适配体-悬浮芯片检测新技术,初步实现了对人血清样本中凝血酶的分析,方法灵敏、特异和快速,展现了良好的应用前景。利用MST技术分析适配体与凝血酶间的相互作用,为深入探究适配体与靶标物的识别偶联机制奠定了基础,也可为药物靶向性和药物作用机制等的研究提供一定的数据支持。