近年来,随着世界范围内抗生素的不合理使用导致兽医临床主要致病菌对常用药物产生了严重的耐药性,而反观近年来的新药研发速率却呈逐年下降趋势,对畜牧养殖业造成了严重威胁。针对这一困境,筛选现处于耐药窗口期的常用药物耐药抑制剂靶点,研发新型抗菌增效剂延缓现有药物使用寿命已迫在眉睫。其中牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌（Pasteurella mutocida,Pm）作为牛呼吸系统疾病的主要病原菌之一,对兽医临床常用药物产生了严重的耐药性。课题组前期研究表明不同耐药表型牛荚膜A型Pm SOS通路基因（rec O、ruv A等）的表达介导了牛荚膜A型Pm的持留,可作为潜在的耐药抑制剂靶点。为此,本研究以SOS反应关键启动基因rec A为靶点,筛选潜在药源分子以期增强氟喹诺酮类药物的治疗作用,并延长其使用寿命。主要研究内容包括以下三部分:首先,以牛荚膜A型Pm的rec A基因为靶基因,采用生物信息学方法对其进行同源建模;通过分子对接的不同精度打分原则从小分子化合物库中筛选靶向Rec A蛋白的抑制剂,结果显示小分子化合物B4964打分较低（glide gscore=-7.916）,推测其可能作用于Rec A蛋白;通过q PCR方法在m RNA水平对B4964抑制rec A基因的作用进行了确证,结果显示,亚抑菌浓度的B4964可极显著抑制由环丙沙星引起的牛荚膜A型Pm rec A基因的表达（P＜0.001）;进一步采用棋盘法测定了B4964与环丙沙星联用的联合抑菌指数,结果显示,B4964与环丙沙星具有相加作用（FIC≤1）,证明B4964可增强环丙沙星的治疗效果。其次,为了进一步评价小分子化合物B4964在体外的药效学,采用常规药理实验方法检测了亚抑菌浓度B4964作用下对环丙沙星诱导的牛荚膜A型Pm耐药形成时间、突变选择窗、突变频率、生物被膜形成能力、抗生素耐受性及细菌持留性的影响,结果显示B4964可抑制rec A基因的表达,延长牛荚膜A型Pm对环丙沙星的耐药形成时间,降低环丙沙星的突变选择窗和不同耐药表型牛荚膜A型Pm的突变频率,抑制了牛荚膜A型Pm生物被膜的形成能力,并抑制了牛荚膜A型Pm持留菌的形成;同时基于牛荚膜A型Pm构建的SOS反应启动子荧光活性报告载体和Rec A蛋白的表达载体,发现B4964与环丙沙星联合用药可显著抑制由环丙沙星诱导的SOS反应的启动,并抑制Rec A的表达。最后,通过细胞毒性试验以及溶血活性试验初步检测了B4964与环丙沙星联合使用的安全性,结果显示联用后并未对RAW264.7细胞以及293细胞产生毒性作用,未对兔红细胞出现溶血活性;构建了小鼠P3-肺炎感染模型以及治疗模型,发现联合用药可增强小鼠的存活率,快速杀灭靶器官组织的病原菌,抑制环丙沙星治疗所诱导的体内持留菌的形成,抑制了突变菌株的形成,以及降低了体内病原菌的突变频率,增强了环丙沙星的体内治疗效果。总之,本研究以牛荚膜A型Pm为模式菌,构建了SOS反应耐药抑制剂筛选平台,筛选获得了能抑制SOS反应潜在药源分子B4964,并证明了其可抑制牛荚膜A型Pm持留菌的产生,为氟喹诺酮类药物耐药抑制剂的研发奠定了基础。