抗菌肽(Antimicrobial peptides),是生物免疫防御系统的重要组成,广泛分布于多种生物,具有分子量小、耐热、广谱抗菌等特性。本文研究了牙鲆抗菌肽Hepcidin基因在不同发育时期胚胎中和在不同组织中的表达分析以及真鲷重组抗菌肽Hepcidin的抗菌活性。 采集牙鲆不同发育时期的胚胎样品,依次为受精后:4小时(2-8细胞期)、20小时(原肠期)、36小时(神经胚期)、44小时(肌节期)、52小时(尾芽期)、68小时(心跳期)、80小时(鱼苗期);采集牙鲆成鱼肝脏(Liver)、脾脏(Spleen)、小肠(Intestine)、鳃(Gill)、心脏(Heart)和头肾(Head Kidney)组织样品。利用Trizol试剂盒提取RNA,进行反转录得到cDNA,随后通过特异性引物扩增Hepcidin基因和内参β-actin基因,分析牙鲆抗菌肽Hepcidin基因在不同发育时期胚胎中和在不同组织中的表达。结果表明在牙鲆胚胎发育过程中Hepcidin的表达量随发育时间的增加而逐渐增强,在鱼苗期达到最大;在成鱼不同组织中的表达量也存在很大差别,在肝脏、脾脏和头肾中表达量较大,在心脏、鳃中的表达量较少,而在小肠中几乎没有。 用数种革兰氏阳性菌、阴性菌和水产动物病原菌作为供试菌株对真鲷重组抗菌肽Hepcidin的诱导表达上清及超滤浓缩液进行抗菌活性研究。结果表明重组抗菌肽对大肠杆菌Escherichia coli (ATCC 25922)、绿脓杆菌Pseudomonas aeruginosa(As 1.2387)以及水产动物病原菌嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophia(As 1.1801)有明显的抑制作用,对其它菌株效果不是很明显。