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癌症是威胁人类健康的主要恶性疾病之一。多年来,各种治疗方法层出不穷,除了外科手术、放疗、化疗等传统治疗手段外,还有高强度聚焦超声(HIFU)外科和超声热疗等新兴疗法。上世纪末,由日本学者梅村晋一郎等提出的声动力学疗法(Sonodynamic Therapy,SDT),该理论是利用超声(Ultrasound,US)能够穿透生物组织,激活癌细胞内富集并长时间潴留的光敏性物质血卟啉(Hematoporphyrin derivatives,HpD),从而产生协同的抗癌作用的抗肿瘤方法。它不仅克服了放疗、化疗等的临床缺陷,而且也优于另外两种单纯超声的抗癌疗效,因而在抗肿瘤研究方面倍受学者的关注,成为极具应用前景的抗肿瘤方法,并在近年来得到了迅速发展。 目前国内外学者对SDT方法已进行了初步的研究,在离体人肿瘤细胞,动物移植瘤方面积累了一些资料,但是其机制的探讨,方法的实际应用尚需进行大量的研究工作。由于不同的超声频率、强度及血卟啉浓度在杀伤肿瘤的同时,对正常组织会造成一定程度的损伤,所以筛选合适的声强及血卟啉浓度对确定杀伤在体肿瘤组织的敏感阈值和触发位点,从而获得理想的最佳的抗癌效果,减少对正常组织的损伤具有重要意义。本论文在国内外学者前期研究的基础上,依托国家自然科学基金项目“超声激活血卟啉抗肿瘤的细胞分子生物学机制”的资助,采用超声频率为2.0MHz,血卟啉浓度为2.5mg/ml及不同超声强度等实验参数,利用普通光学显微镜,荧光显微镜,透射电镜,扫描电镜等方法,对艾氏腹水瘤(EAT)的形态结构及诱发的在体肉瘤组织的生长体积大小、组织细胞形态结构、细胞凋亡等方面的动态变化进行观察分析,研究超声激活血卟啉对EAT实体瘤组织及腹水癌细胞的杀伤抑制作用以及所造成的损伤在体内的动态变化发展过程,为进一步探讨SDT的杀伤作用机制及其临床应用积累丰富资料。 本论文得出以下主要结论: 1.利用荧光显微镜连续观察了不同生长状态下艾氏腹水瘤细胞对血卟啉的吸收情况,首次确定了不同实验系统SDT法抗肿瘤的给药方式,以及超声激活血卟啉的最佳时间。 2.采用连续时间段超声处理,发现 2.OMHz,声强 1.OW/Cm’超声处理 3min为一个有效实验参数组合,可造成癌细胞的大量损伤。在此条件下产生的损伤随时间的延长,可产生由初级损伤引起的一系列继发性损伤。 3.通过光镜、扫描电镜和透射电镜三个不同层次对ZMHZ超声结合血叶咐作用体外腹水型EAT细胞的观察,发现单纯超声对癌细胞有一定的损伤;与单纯超声处理相比,同等强度的超声激活血叶晰由于其协同作用对EAT细胞有显著的杀伤作用;损伤集中体现在对癌细胞膜系统和遗传信息表达系统的破坏。 4.通过形态学、PIHO双荧光染色和 AV-PI 双荧光染色研究首次发现2.OMHz、1.OWcm’低强度超声激活血卜琳能诱导MT细胞凋亡现象,提示了SDT法诱导细胞凋亡是在低强度超声处理时杀伤癌细胞的机制之一。随着超声强度的增加,在继续诱导细胞凋亡的同时亦可直接造成部分细胞的病理性坏死,山此表明超声激活血叶琳抗癌存在着诱导细胞凋亡和直接坏死两种模式。 5.光镜和透射电镜观察超声结合血叶琳对实体型EAT肿瘤的损伤发现,单纯超声对癌细胞产生有限的杀伤效应与空化作用有关,而超声结合血叶琳表现出的明显杀伤作用涉及众多因素和多种途径。 6.在荷瘤动物肿瘤生长抑制的实验中,发现两次超声结合血叶琳处理产生的叠加效应不仅明显高于一次处理,而且可以产生较为持久的抑制效果。