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目的: 1.证实推拿对神经病理痛CCI模型具有较好的镇痛效应。 2.证实推拿能够抑制脊髓背角中枢敏化,从而缓解CCI模型神经病理痛,为推拿治疗CCI模型的镇痛效应机制研究提供科学依据。 3.验证NK1R通道是否参与推拿抑制脊髓背角中枢敏化,从而缓解CCI模型神经病理痛。 方法: 1.观察推拿对神经病理痛CCI模型的镇痛效应:将SD大鼠随机分成空白组、假手术组、CCI模型组、CCI模型+推拿组。应用4-0铬制羊肠线结扎大鼠坐骨神经,每道间隔约1mm,共3道来制备CCI模型。CCI模型组进行CCI造模,假手术组仅造成手术创伤,CCI模型+推拿组对CCI模型大鼠进行推拿治疗。检测各组大鼠不同时间点的机械足反射阈值(PWT)、热缩足反射潜伏期(PWL)的变化。 2.观察推拿对神经病理痛CCI模型大鼠腓肠肌及坐骨神经的影响:空白组、假手术组、CCI模型组、CCI模型+推拿组四组大鼠造模及干预结束后,于造模术后第18天取材,观察腓肠肌湿重、恢复率,及观察HE染色后肌细胞截面积的变化,肌细胞及坐骨神经的结构变化。 3.观察推拿对CCI模型外周血SP的影响:空白组、CCI模型组、CCI模型+推拿组三组大鼠造模及干预结束后,于造模术后第18天取材,Elisa法检测外周血中SP含量的变化。空白组、CCI模型组、CCI模型+推拿组三组蛋白取自第一个实验相同组别。 4.观察推拿对CCI模型DRG及脊髓SP和NK1R蛋白含量的影响:随机分配6只雄性SD大鼠作为强直刺激组,麻醉后暴露坐骨神经并剥离坐骨神经,于在体电生理平台上予大鼠6串强直刺激造成坐骨神经急性损伤。用Western Blot的方法分别检测空白组、CCI模型组、CCI模型+推拿组三组大鼠右侧L4、L5、L6背根神经节SP及NK1R的变化;分别检测空白组、假手术组、CCI模型组、CCI模型+推拿组、强直刺激组五组大鼠右侧脊髓背角SP及NK1R的变化。空白组、假手术组、CCI模型组及CCI模型+推拿组蛋白取自第一个实验相同组别。 5.观察NK1R拮抗剂对CCI模型的影响及推拿对CCI模型的作用:将SD大鼠随机分成CCI组、CCI+拮抗剂组、CCI+推拿组。三组均进行CCI造模,CCI组造模后不作干预,CCI+拮抗剂组造模后第3天起足底注射NK1R拮抗剂win51708,CCI+推拿组造模后第3天起推拿手法干预。检测三组大鼠造模前、后第3、7、10天PWT和PWL的改变。 6.观察大鼠脊髓背角场电位的变化:将SD大鼠随机分成空白组、CCI模型组、CCI模型+推拿组,造模及干预方法同前。于造模后第18天各组大鼠脊髓背角场电位的变化并记录。 结果: 1.推拿对神经病理痛CCI模型的镇痛效应:CCI模型+推拿组大鼠的PWT值在术后第7天开始逐渐回升,第10天与CCI模型组对比有显著性差异(P<0.05)。CCI模型+推拿组的PWL值与CCI模型组相比差异显著,第10天(P<0.001)、第14天(P<0.01),第17天(P<0.05)。 2.观察推拿对神经病理痛CCI模型大鼠腓肠肌及坐骨神经的影响:CCI模型+推拿组大鼠腓肠肌细胞截面积大于CCI模型组而小于空白组,CCI模型+推拿组腓肠肌细胞截面积与正常组相比没有统计学差异(P>0.05)。 3.观察推拿对CCI模型外周血SP的影响:空白组、CCI模型组、CCI模型+推拿组三组外周血SP含量组间比较无统计学差异(P>0.05)。 4.观察推拿对CCI模型DRG及脊髓SP和NK1R蛋白含量的影响:CCI模型+推拿组CCI造模术后18天DRG的SP、NK1R含量与空白组相比变化不明显,无统计学差异(P>0.05)。CCI模型组及CCI模型+推拿组脊髓背角SP水平均有明显升高趋势,但各组组间对比无统计学差异(P>0.05)。CCI模型组及CCI模型+推拿组脊髓背角NK1R表达水平有明显升高趋势,但是两组与空白组相比没有统计学差异(P>0.05)。强直刺激组脊髓背角NK1R表达升高明显,但是与各组间比较无统计学差异(P>0.05)。 5.观察NKIR拮抗剂对CCI模型的影响及推拿对CCI模型的作用:CCI模型+拮抗剂组大鼠术后第3天的PWT明显高于CCI模型组及CCI模型+推拿组,组间比较差异显著(CCI模型+拮抗剂组与CCI模型组相比P<0.001;CCI模型+拮抗剂组与CCI模型+推拿组相比P<0.01)。CCI模型+拮抗剂组和CCI模型组的PWL在造模后第7天相比有显著性差异(P<0.05),CCI+推拿组的PWL和CCI模型组在造模后第10天相比有显著性差异(P<0.001),以第3天为时间节点,随着推拿手法干预,CCI模型+推拿组的PWL有回调的趋势。 6.观察大鼠脊髓背角场电位的变化:CCI模型组大鼠脊髓背角场电位在强直刺激后明显升高,多个时间节点与空白组有显著统计学差异(P<0.05)。CCI模型+推拿组大鼠脊髓背角场电位与CCI模型组相比在多个时间节点上具有显著统计学差异(P<0.05)。CCI模型+推拿组大鼠脊髓背角场电位与空白组相比在各个时间节点上均无统计学差异(P>0.05)。 结论: 1.推拿对CCI模型引起的神经病理痛有较好的镇痛效果;但是在本研究中推拿对CCI模型大鼠腓肠肌湿重及恢复率改善不明显,肌纤维截面积略有改善。 2.本研究中推拿对外周血SP影响不明显,DRG的SP、NK1R影响不明显,脊髓背角SP、NK1R均有上调趋势。 3.NK1R受体拮抗剂可短期阻断疼痛,但是推拿干预的积累效应明显。 4.推拿可抑制脊髓背角中枢敏化,从而达到镇痛的效应。