【摘 要】
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目的:本课题旨在从中药没食子汤剂中直接制备得到形态规则的球形纳米颗粒,并探索其形成机制和在抗菌、抗氧化、pH响应、作生物基底材料和细胞内蛋白质递送等领域的潜在应用。方法:（1）采用差速离心法从没食子提取液（TGE）中制得球形纳米颗粒（TG-NPs）,通过扫描电子显微镜（SEM）、透射电子显微镜（TEM）、马尔文激光粒度仪、紫外可见分光光谱仪（UV）、傅里叶红外光谱仪（FT-IR）进行初步表征;（2
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目的:本课题旨在从中药没食子汤剂中直接制备得到形态规则的球形纳米颗粒,并探索其形成机制和在抗菌、抗氧化、pH响应、作生物基底材料和细胞内蛋白质递送等领域的潜在应用。方法:（1）采用差速离心法从没食子提取液（TGE）中制得球形纳米颗粒（TG-NPs）,通过扫描电子显微镜（SEM）、透射电子显微镜（TEM）、马尔文激光粒度仪、紫外可见分光光谱仪（UV）、傅里叶红外光谱仪（FT-IR）进行初步表征;（2）通过测定没食子多酚纳米球TG-NPs对DPPH和ABTS自由基清除的速率进行抗氧化能力评估,通过观察纳米球TG-HP NPs在不同pH值缓冲溶液中的降解情况和多酚含量变化来进行pH响应性降解研究;（3）采用高效液相色谱-质谱分析联用（LC-MS）技术和能量色散X射线光谱（EDX）对纳米球TG-NPs的化学成分和元素分布进行分析,通过茚三酮显色实验检验蛋白质/氨基酸的存在;（4）依据成型机理,在简单体系中将没食子多酚和10种具有不同功能的蛋白质进行自组装,得到没食子多酚蛋白纳米球（TG-protein NPs）,并对其进行表征和性质考察,包括稳定性、pH响应性和作生物活性模板的潜力;（5）通过牛津杯法、平板计数法、SEM细菌形态观察法、活/死细菌染色法和结晶紫染色实验检测没食子多酚纳米球（TG-NPs和TG-LYZ NPs）对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用和对生物膜的清除效果;（6）通过生物透射电镜观察纳米球TG-protein NPs在A549细胞内的分布情况,通过激光共聚焦显微镜（CLSM）追踪荧光标记过的TG-protein NPs进入细胞的过程。通过β-半乳糖苷酶活性染色实验检测蛋白质进入细胞后的生物活性变化。结果:（1）没食子多酚纳米球为形态规则的球形纳米颗粒,TG-LP NPs直径为413.89±202.95 nm,TG-HP NPs的直径为230.34±59.48 nm;（2）TG-LP NPs和TG-HP NPs保留了没食子提取液的抗氧化能力;纳米球TG-HP NPs在pH＞7.0时易发生降解,且没食子多酚的含量降低;（3）没食子多酚纳米球TG-NPs的主要化学成分是没食子多酚类化合物,含有C、O、N三种元素,茚三酮显色实验证实了纳米球中含有蛋白质;纳米球的成型机理是没食子多酚类化合物和没食子本身存在的少量虫瘿蛋白在提取过程中发生自组装形成的。（4）没食子多酚可以与10种不同功能蛋白质发生自组装形成TG-protein NPs,其具有在碱性条件下易降解的pH响应性;纳米球TG-HP NPs和TG-BSA-1 NPs在14天内的稳定性良好;纳米球TG-BSA NPs可以作为生物活性模板,在其表面修饰Ag纳米粒子或TA-FeⅢ涂层。（5）没食子多酚纳米球对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌具有良好的抑制效果和生物膜清除能力。（6）没食子多酚蛋白纳米球可作为细胞内蛋白递送的有效载体,并保留蛋白质的部分生物活性。结论:通过差速离心法可以从没食子汤剂中直接制得球形纳米颗粒,可通过不同的离心力来调控纳米球的粒径大小,其具有良好的抗氧化能力和pH响应性,成型机理是由没食子多酚类化合物和虫瘿蛋白发生自组装形成的。依据此机理,没食子多酚化合物可以和10种具有不同性质功能的蛋白质自组装形成没食子多酚蛋白纳米球TG-protein NPs,可作为具有生物活性的模板材料,并且具有良好的抗菌效果和将蛋白质递送至细胞内的能力。
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