研究背景:帕金森病(PD)是最常见的神经退行性疾病之一。在65岁以上的人群中帕金森病的患病率达到1%以上。在临床上主要表现为静止性震颤、强直、运动迟缓以及对左旋多巴治疗有明显疗效,特征性的病理改变主要是黑质致密部大量多巴胺神经元的丢失和残存多巴胺神经元内路易小体形成。到目前,帕金森病的确切病因仍未阐明,但是,越来越多的基因被认为对PD起致病作用,α-synuclein,UCH-L1,和LRRK2的突变被认为参与了家族性常染色体显性遗传性帕金森病的发病,而parkin,PINK1,DJ-1和ATP13A2被认为是早发型常染色体隐性遗传帕金森病的致病性基因。据我们所知,帕金森病通常被划分成早发型PD(early-onset PD,EOPD)和晚发型PD(late-onset PD,LOPD),家族性和散发性,以及常染色体显性遗传和隐性遗传。大多数文献把发病年龄小于50岁的帕金森病定为早发型。在1997年,通过连锁分析Parkin基因被Matsumine等锁定在染色体6q25.2-q27。Parkin基因突变在EOPD中具有很高的检出率。在亚洲,韩国、中国以及台湾地区都对parkin基因有过研究报道。Chung EJ等采用基因定量分析的方法在94例EOPD中发现3例患者携带parkin基因的复杂杂合突变;Guo JF等采用直接测序和实时定量PCR的方法对29个中国家系的45例EOPD患者的DNA进行分析,发现14个家系中的25例患者携带不同类型的parkin基因突变,包括点突变、杂合突变、纯合突变以及复合型杂合突变;Wu RM等在41例EOPD中发现4例患者携带parkin基因的突变。PINK1基因是在研究肿瘤抑制物PTEN的作用机制过程中被发现的。到目前,文献报道PINK1基因的外显子重排突变极其罕见,主要是点突变。因此,针对PINK1基因的突变分析,大多采用变性高效液相色谱技术(Denaturing High PerformanceLiquid Chromatography,DHPLC)和直接测序的方法。PINK1基因突变率在不同的族群中有所不同,基本在1%-9%,成为继parkin之后,EOPD的第二常见突变基因。目前国内对EOPD患者的parkin和PINK1基因的突变分析报道仍很少见,且缺乏对基因突变和临床表型之间的相关分析。因此,对中国EOPD患者的parkin和PINK1基因的突变筛查以及相关临床特征的分析显的很有必要。目的:运用DHPLC和直接测序的方法分析研究中国EOPD患者parkin和PINK1基因点突变情况,以及运用实时定量PCR分析parkin基因外显子重排突变,并探讨PD患者基因型与临床表型之间关系。方法:按照以下标准在浙江大学医学院附属第二医院神经内科收集69例EOPD患者,(1)发病年龄小于50岁;(2)至少具备帕金森病四项特征性症状中两项(静止性震颤、运动迟缓、肌肉强直、姿势障碍);(3)对左旋多巴治疗有好的反应;(4)排除由其他神经系统疾病或药物或毒性物品引起的继发性帕金森病患者。首先,采用实时定量PCR的方法检测parkin基因12个外显子的重排突变;对没有重排突变或只有杂合重排突变的外显子再作DHPLC分析和直接测序排除parkin基因点突变;最后,对仍未查到突变或只有杂合突变的病例作DHPLC分析和直接测序筛查PINK1基因的点突变。结果:第一:应用荧光定量PCR方法发现19例PD患者具有parkin基因不同外显子的重排突变。其中,M630和M631患者为两姐妹都为3号、4号和7号外显子的杂合缺失;M5患者含有3号和4号外显子的纯合缺失;M6患者含有2号、6号外显子的杂合缺失;M10患者含有4号外显子纯合缺失;M30患者6号外显子杂合缺失和11号外显子杂合重复;另外,6例患者含有单一外显子的杂合缺失;7例患者含有单一外显子的杂合重复。第二:应用DHPLC和直接测序的方法在一例患者的parkin基因上发现一新的呈杂合状态的单一碱基变异位点c.2T＞C(p.M1T),另外,在parkin和PINK1基因上发现多个SNPs。第三:临床上,在含有纯合突变或复合杂合突变的患者中,其PD起病时常为双侧对称出现症状,如抖动、肌肉强直、运动迟缓。有突变(包括单一杂合突变)的患者起病年龄明显早于不含突变的患者。结论:第一:在本组患者中,parkin基因的突变率为28%,低于大多文献报道的50%,很可能是因为我们选的患者多是散发性的,而不是家族性PD。第二:除了SNP外,本研究在PINK1基因上没有发现突变,这正是说明了PINK1基因的低突变率,而且在我国的PD患者中尤为低。第三:有parkin基因突变的患者除了PD起病年龄明显早于无parkin基因突变的患者外,没有其他区别于无parkin基因突变患者的特异临床症状,所以从临床表现上无法去判断PD患者是否含有parkin或PINK1基因的突变。