论文部分内容阅读
目的：对乌拉尔甘草内生菌分离、纯化；初步筛选出对病原菌有拮抗效果的菌种作为典型菌种，进一步对典型菌种进行生物学功能研究以筛选出生物学功能多样的菌种作为目标菌种；最后，考察目标菌种对盐胁迫和干旱胁迫下甘草种子萌发和幼苗生长的影响效应及其生理生化机制，本研究不仅为内生菌资源的进一步开发提供科学依据，同时也为通过接种内生菌来提高逆境胁迫下甘草的生长提供科学依据。 方法：采用组织块分离法，在牛肉膏蛋白胨培养基和PDA培养基中分离、纯化内生细菌和真菌，内生细菌和真菌分别于28℃恒温培养箱中培养3-5d和5-7d；采用滤纸片法，通过观察有无抑菌圈及抑菌圈的大小来检测内生菌对病原菌的拮抗效果；通过观察内生菌在不同磷源、碳源、氮源培养基中的生长状况来检测内生菌对营养元素的利用能力；通过观察内生菌在不同pH和不同NaCl浓度的培养基环境中的生长状况，来检测内生菌的耐受能力；以16S rDNA测序，对比核糖体数据库鉴定典型菌种；最后采用培养皿纸上发芽法和发芽盒沙培法考察目标菌种对盐胁迫和干旱胁迫下甘草种子萌发、幼苗生长和生理生化指标的影响效应。 结果：通过组织块分离法在牛肉膏蛋白胨培养基中分离出内生细菌100株，其中根占76％、茎占15%、叶占9%；从PDA培养基中分离出内生真菌19株，其中根占42.11%、茎占36.84%、叶占21.05%；通过滤纸片法初步筛选出对西瓜枯萎病菌、小麦根腐病菌、黄花枯萎病菌、烟草赤星病菌、棉花枯萎病菌等病原菌综合抑制效果较好的菌种8种，分别编号为G2、G3、G5、G8、G9、G15、Y1和Y2，在此基础上，进一步对这8种菌种的溶磷、碳源和氮源利用以及耐盐、酸碱等生物学特性进行系统研究，筛选出综合性能较好的菌种2种，分别为G2（地衣芽孢杆菌）和G5（短小芽孢杆菌）。最后，通过种子萌发和幼苗生长实验研究发现，菌种G2、G5可以缓解盐胁迫和干旱胁迫下对种子萌发的抑制，菌株G2可以缓解盐胁迫对甘草幼苗根和茎生长的抑制；菌种G2、G5可以缓解盐胁迫所造成的甘草体内自由氧增多，同时在干旱胁迫下可以通过提高抗氧化酶活性来促进甘草幼苗清除过多的自由氧；菌种G2和G5在盐胁迫下可以通过提高脯氨酸含量促进甘草幼苗对渗透调节物质的调节，菌种G5可以在干旱胁迫下可以通过提高脯氨酸含量促进甘草幼苗对渗透调节物质的调节；菌种G2和G5在盐胁迫下可以明显降低MDA含量，降低盐毒害，在干旱胁迫初期降低MDA含量，降低初期干旱毒害。 结论：乌拉尔甘草中含有丰富的内生菌，其中能够对病原菌有拮抗效果且对营养元素高效利用的菌种能够起到缓解甘草盐胁迫和干旱胁迫毒害的作用。