单环刺螠硫醌氧化还原酶相互作用蛋白质的筛选

来源 :中国海洋大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:nobodypan
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硫化物对于多数生物是有毒的,其主要表现为可以抑制线粒体电子传递链细胞色素氧化酶的活性,从而阻止有氧呼吸的进行。近年来,人们发现一些沿岸底栖生物可以氧化硫化物使之成为低毒或无毒的产物,以减低或解除硫化物毒性。硫醌氧化还原酶(Sulfide:quinone oxidoreductase,SQR)被认为是这一氧化过程的关键酶。本文对我国沿海分布的单环刺螠(Urechis unicinctus)SQR可能的相互作用蛋白进行了筛选和初步的定性,为深入揭示硫化物的氧化代谢机制研究提供基础数据。   采用pET28a(+)表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)菌中体外表达出包涵体形式的单环刺虫益6His-SQR;后采用稀释复性法获得具有较高酶学活性(5.04μmol/min/mg)的单环刺螠6His-SQR;首次采用His-pulldown技术,使用饱和结合于Ni2+-NTA树脂上的单环刺螠6His-SQR(1 mLNi柱可结合3 mg 6His-SQR),从50μM硫化物处理的单坏刺螠体壁蛋白提取液中钓取了2个可能与SQR相互作用的蛋白质,其分子量分别约为40 ku和60 ku;经毛细管液相色谱-离子肼质谱分析,初步判断这两种蛋白质为细胞色素P450(cytochrome P450)和腺苷三磷酸结合盒转运蛋白(ATP-binding cassette transporter),随后对两种蛋白可能的功能进行了探讨。
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