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相柑橘黄龙病(CitrusHuanglongbing),属于系统侵染的细菌病害,病原是韧皮部杆菌亚洲种(CandidatusLiberibacterasiaticus),属于难培养细菌。该病病症复杂,易与缺素、病毒病害等混淆。柑橘黄龙病在中国发生很严重,严重为害柑橘产业。目前对于黄龙病尚无有效治理手段,主要依靠严格的检疫措施防止该病扩散,所以建立高效,快捷,操作简单的检测技术,为疑似柑桔黄龙病初期的诊断提供准确、可靠的检验检疫技术,是防止此病原菌传播有效手段。现在检验柑橘黄龙病菌的主要方法是PCR,虽然简单快捷、准确灵敏,但是由于柑橘黄龙病原是难培养细菌,在植株组织中分布不均且含量少,病原DNA的获得过程繁琐,再加上当前的大多数黄龙病病原菌分子检测使用的靶标均未经过基因组比较,因而常规PCR有时会出现假阴性或假阳性问题。本实验通过本地BLAST软件,采用单序列比多序列的方法,将目的菌Ca.L.asiaticus的全基因组序列依次与同属的每个其他种的全基因组序列进行比对。选用多序列比对的全基因组比对技术,在全基因组比对的基础上挑选出了合适的核心基因作为分子靶标,设计出了特异性的探针和引物,建立了 Routine PCR和TaqMan探针q-PCR的检测方法,实验结果表明这两种方法均能把目标菌韧皮部杆菌亚洲种Caa.L.asi与 Cau.L.L.amenus、Caaican 及 Ca L.solanacear 3 个种区分开来,最高灵敏度达到6copies/μL,相当于能检测出0.01 fg/μL的DNA,具有良好的特异性和高灵敏度。对实际样品进行检测,能从24份湖南疑似黄龙病叶片样品中检测到3份带菌,有较高的检出率。此外,梨火疫病菌(Erwinniaamylovora)可引起梨、苹果等蔷薇科植物的火疫病。本研究从梨火疫病菌中鉴定并克隆出两个clpV同源基因,通过同源重组的方法,构建了梨火疫病菌的clpF基因的缺失突变体△clpV-1和△clpV-2,初步分析了△clp V-1和AclpV-2在影响病原菌致病性和梨火疫毒素产量的作用。结果显示,△clpV-2与野生型相比致病性显著降低,梨火疫毒素产量显著下降,而△clpV-1与野生型相比差异不显著。