大肠杆菌噬菌体的分离鉴定与初步应用

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鸡的大肠杆菌病是在世界范围内影响家禽业发展的主要细菌病之一,本病在鸡群中普遍流行,给养禽生产带来巨大的经济损失。本研究以35株禽源致病性大肠杆菌为宿主菌,进行了噬菌体的分离,并对噬菌体分离株进行了生物学特性的测定以及雏鸡大肠杆菌病治疗试验。采用纸片扩散法测定4株大肠杆菌分离株对药物的耐药性,采用动物试验法测定4株大肠杆菌的致病性并筛选出一株毒力最强的细菌进行半数致死量的测定,结果表明,菌O15和菌O24对药物的耐药性最强,耐药率为70.6%,4株细菌对头孢唑啉非常敏感,对氨苄青霉素、阿莫西林、卡那霉素、四环素、萘啶酸、恩诺沙星、环丙沙星和红霉素等8种药物表现出完全耐药性;大肠杆菌分离株O24毒力最强,对7日龄雏鸡的半数致死量为6.6×107cfu。以35株大肠杆菌分离株为宿主菌,采用双层琼脂平板法分离、鉴定、纯化噬菌体,并测定噬菌体的效价,对噬菌体的裂解谱进行了测定。结果共分离出5株噬菌体,分别命名为Bp2、Bp3、Bp4、Bp5和Bp6;噬菌体效价较高,均可达108pfu/mL以上;Bp4对致病性大肠杆菌的裂解谱最宽,其宽噬率为34.3%;Bp6和Bp5的宽噬率分别为8.6%;而Bp2和Bp3的宽噬率分别为3.8%。将噬菌体Bp6增殖纯化后进行电镜观察,并测定其热稳定性、pH值稳定性、最佳感染复数(MOI)和一步生长曲线。结果:头部为立体对称,直径约48nm,尾长约100nm,属肌尾噬菌体科;在60℃作用60min及在pH4.5~9.0的环境下作用2h仍可保持较高裂解活性;MOI为0.001;感染宿主菌的潜伏期为25min~27min,爆发期为15min,平均裂解量为83.8。通过噬菌体Bp6的毒性试验来验证噬菌体的安全性,并通过噬菌体治疗试验来检测噬菌体治疗雏鸡大肠杆菌病的效果。结果表明,噬菌体Bp6悬液对雏鸡是安全的,在感染致病性大肠杆菌前3h给雏鸡气囊接种6×108pfu噬菌体,雏鸡的死亡率由90%降至20%,而皮下接种相同剂量的噬菌体,雏鸡的死亡率由90%降至70%。因此气囊接种是预防雏鸡大肠杆菌感染的最理想的接种方法。
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