苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensi,Bt)是一种广泛用于农业害虫生物防治的昆虫病原菌,而表达Bt杀虫蛋白的转基因抗虫棉是当前最为重要的防治棉铃虫害手段。由于棉铃虫对第一代.传基因Bt棉已产生极强抗性,因此,亟需寻找一种新的对棉铃虫有效的Cr毒素来延缓或抵消其抗药性。但由于各种人为干扰或农药残留等因素,导致、普通分离源中较难分离获得新型Bt菌株,因此,寻找特殊生境分离源对挖 Bt新基因具有重大意义。基于以上思路,本研究以煤矿为分离材料,并从.15份煤矿样品中分离出2株Bt,编号分别为BRC-LBR1和 BRC-LBR2。由于两分(?)术来源特殊,为进一步了解其各方面的生物学特性,分别对其进行了形态学、生理生化分析。经光学显微镜检测发现2株菌均具有菱形伴胞晶体。生(?)化检测结果表明,两分离株大部分指标均相同,仅在与脲酶水解反应上(?)差异。选取两分离株及Bt库斯塔克亚种菌株HD73对棉铃虫(Helicoverpa(?)nigera)进行生物测定,结果表明,两分离株对棉铃虫均有活性,且BRC-LBR1对棉铃虫的毒力效果高于标准菌株HD73。利用11对通用引物对两分离株进行Cry毒素基因分析,结果表明,2株菌均含有cry1基因型。经克隆、测序后发现,BRC-LBR1中的cry1亚基因型与cry1Ac同源性极高,达99%;相较之下,BRC-LBR2中的cry1亚基因型与cry1Ka同源性较低,为98%,且尚未见到杀虫基因cry1Ka对棉铃虫有效的报道,因此选取分离株BRC-LBR2进行基因组测序分析,以期挖掘得到对棉铃虫有效的新基因。经NGS测序发现,BRC-LBR2中含有2种编码杀虫蛋白的基因,将2段基因全长序列登录NCBI,获得登录号分别为KU761577和KU761578,并提交Bt毒素命名委员会正式命名为cry1Be5和vip3Ad6。利用Thermo Scientific高效液相质谱仪对分离株BRC-LBR2的伴胞晶体蛋白进行鉴定,结果表明,分离株表达的杀虫蛋白为Cry1Be类,与基因组测序所得结果一致。利用生物信息学分析cry1Be5和vip3Ad6基因序列及其编码蛋白的理化性质等,并对两种蛋白的功能结构域、二级结构及三维结构等进行分析预测。综合以上结果表明,从煤矿这一特殊生境中能够分离获得Bt菌株,且挖掘得到1个对棉铃虫有效的新基因,这不仅拓宽了 Bt采集来源的种类,丰富了 Bt的生态学背景,还为Bt新基因的快速挖掘鉴定提供了新的方向,对其进一步的推广应用也具有重要的指导意义。