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华山松(Pinus armandii Franch.)是重要的乡土速生针叶树种,有较高的综合利用价值,探索该树种的离体繁殖技术,建立快速繁殖体系,对该树种的遗传改良研究和开展生物工程工作奠定良好的理论和技术基础。本文创新点在于以成熟胚为外植体,成功建立了华山松的直接器官发生体系及其植株再生体系;并分别以幼胚和成熟胚为外植体,对华山松的体细胞胚胎发生途径进行了探索,国内外尚未见到相关报道。主要研究结果有: 1 直接器官发生的研究 采用70%酒精0.5min和0.1%升汞10min对华山松种子灭菌处理后,剥取种胚垂直接种于培养基表面。华山松的不定芽诱导培养基为:DCR+BA 3.0～5.0mg/L+蔗糖30g/L,诱导率最高达到67.57%;分化培养基为:DCR+0.1mg/L IBA+2g/L AC;生根培养基为:1/2DCR+4.0～5.0mg/L IBA,从诱导的愈伤组织内可以分化出较粗短的不定根,但这种生根苗移栽时较难成活。 2 成熟胚的体细胞胚胎发生研究 华山松成熟胚诱导愈伤组织的培养基成分为:DCR+2,4-D10mg/L+BA 4mg/L+CH,肌醇各1000mg/L+Gln500mg/L,其中类似胚性愈伤组织诱导率达到21.58%。培养2w后将愈伤转至与诱导培养基组分相似,但植物生长调节剂降低10倍的固体或液体培养基上进行继代培养,愈伤组织最终褐化死亡。 3 未成熟胚的体细胞胚胎发生研究 华山松未成熟胚诱导愈伤组织的培养基成分为: DCR+2,4-D10mg/L+BA,KT各4mg/L+CH,肌醇各1000mg/L+Gln500mg/L; 1/2LM+2,4-D2mg/L+BA lmg/L+CH,肌醇各1000mg/L+Gln500mg/L; 将幼胚接种在DCR培养基上只能诱导出愈伤组织,其中类似胚性愈伤组织率最高达到47.62%。以1/2LM为基本培养基时,子叶胚前期的幼胚诱导愈伤组织的胚性可高达52.71%。但幼胚诱导的愈伤组织经固体继代培养和液体悬浮培养后,都没有胚状体的分化。华山松的子叶期幼胚在1/2LM培养基上发生早熟萌发现象,诱导出具有根和茎的完整植株,且诱导率达92%以上。 总之,华山松的组培苗生根不易,应加强组培苗瓶内瓶外的生根诱导处理;体细胞胚胎发生困难,应对如何有效的保持和增殖胚性愈伤组织,诱导胚状体的分化及体细胞胚的萌发等进行深入研究。