诺龙酶联免疫检测方法的研究

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本论文对诺龙{17β-NT}的酶联免疫分析方法进行了深入系统的研究。论文首先设计了17β-NT的半抗原,提出了一种17β-NT半抗原的合成方法,并成功合成了17β-NT的半抗原,研究了半抗原与载体蛋白的结合方法,制备了高效价和高特异性的诺龙抗体。通过对免疫分析形式的选择、分析条件的优化,建立了一种简便、快捷、实用的诺龙免疫分析方法—直接竞争酶联免疫检测方法。此法灵敏度较高,IC50为0.08μg/kg,IC15为0.0055μg/kg。五种结构类似化合物的IC50值均高于3.2 ng/mL,交叉反应小,表明抗体的特异性好。板内变异和板间变异的变异系数均低于20%,说明方法的稳定性较好。详细考察了不同样品基质对ELISA方法的影响,通过试验得到了分别针对不同样品的基质消除方法及样品提取方法。C18固相萃取柱在本实验中被应用于功能食品中基质的消除,系统优化了固相萃取条件,建立了样品净化方法。应用新建立的固相萃取-酶联免疫分析方法消除了样品复杂基质的影响,对市售两种功能食品进行了诺龙的添加回收实验,样品的回收率在71.0%-91.5%,证明了方法的准确性,进一步采用液相色谱方法对所建立的上述ELISA方法进行了有效性验证,对两种方法的检测结果进行线性回归分析,所得数据统计结果显示上述ELISA方法与HPLC方法一致性较好(R2>0.9),进一步说明了建立的诺龙固相萃取-酶联免疫分析方法的准确性。
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