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第一部分CD133-鼻咽癌细胞的分选与干性能力研究目的:初步通过对CD133-的鼻咽癌细胞进行分选,探讨CD133-细胞的干性能力。方法:(1)采用免疫磁珠法分别分选人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞株的CD133-细胞;(2)采用流式细胞仪分别检测分选后两组细胞的CD133表达率;(3)采用Trans-well小室实验检测CD133+细胞及CD133-细胞的侵袭能力;(4)通过构建移植瘤模型,观察CD133+细胞及CD133-细胞的体内致瘤能力。结果:(1)流式细胞仪检测结果发现,CD133+组细胞亚群的CD133表达明显高于CD133-组;(2)CD133+组细胞的侵袭能力明显高于CD133-组细胞;(3)102个CD133+细胞可成功于裸鼠体内成瘤,而CD133-细胞未能致瘤。结论:经CD133免疫磁珠分选,可成功分选出CD133+及CD133-的鼻咽癌细胞,且CD133-细胞亚群可被视为鼻咽癌非肿瘤干细胞群。第二部分X线照射CD133-鼻咽癌细胞后干性的变化目的:探讨X线对CD133-鼻咽癌细胞的干性能力的影响方法:(1)采用0、2、4、6、8Gy的X射线照射经免疫磁珠分选所得的CD133-细胞,并通过MTT法观察的其生长情况;(2)采用MTT法所筛选的最适照射剂量照射CD133-细胞,通过Transwell小室法及体内成瘤实验观察照射前后其干性特征变化;(3)采用RT-PCR检测其CD133、SOX2、OCT4及Nanog m RNA表达变化,WB检测其CD133、SOX2、OCT4及Nanog蛋白表达变化。结果:(1)MTT法结果提示两组细胞的LD50分别为4.439Gy,4.821Gy,故采用4Gy为其最适照射剂量;(2)4Gy的电离辐射可增强CD133-细胞亚群的侵袭能力以及体内致瘤能力;(3)电离辐射上调CD133-细胞的干细胞相关基因的表达。结论:X射线增强CD133-鼻咽癌细胞的干性潜能,上调干性相关基因的表达。