鲤鱼精子DNA的制备及其消除溴化乙锭污染物的应用研究

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本文以鲤鱼鱼白为原材料提取了高质量的鲤鱼精子DNA(csDNA)和染色质并通过多种技术进行了性能表征。此外,还研究了csDNA和染色质对溴化乙锭(EtBr)的去除性能及其影响因素,探索利用csDNA或染色质选择性去除EtBr污染物的可行性。具体结果如下:(1)csDNA性能对比、csDNA电泳和紫外吸收光谱结果表明,浓盐法是提取csDNA的最佳方法,且得到的csDNA与商业DNA相似。浓盐法优化结果表明,当SDS浓度为0.63%,Na Cl浓度为75 g·L-1,提取温度为30°C,提取时间为40 min时,早春鱼白中csDNA的提取率为11.7%。此外,紫外吸收光谱表明,EtBr与csDNA发生嵌插相互作用。csDNA熔点测定结果表明,csDNA被EtBr嵌入后熔点增加了12.7°C,csDNA的结构稳定性变强。荧光光谱表明,EtBr与csDNA形成了稳定复合物。(2)散射共振光谱表明,当pH7.4、35°C时,EtBr的DNA结合饱和值为15.59。Ca Cl2、SDS、CTAB、葡萄糖、尿素和VC促进二者的结合,分别使DNA结合饱和值提高了8.92%、19.63%、8.92%、8.92%、19.62%和19.62%,EtBr的去除效率提高了1.03%、4.64%、4.79%、2.20%、1.11%和3.14%。Na Cl、硼酸和乙酸抑制二者的结合,分别使DNA结合饱和值降低了11.03%、11.03%和7.63%,EtBr的去除效率降低了3.84%、4.82%和7.51%。(3)红外光谱和荧光显微镜观察结果表明,染色质也可以选择性吸附EtBr污染物。批量吸附实验结果表明,在pH7.4、30°C条件下,0.5 g·L-1的染色质在3 min内对2mg·L-1EtBr的去除率超过99%。电泳废水处理结果表明,染色质在TAE和TBE缓冲体系中对EtBr的最大吸附量分别为36.64 mg·g-1和39.72 mg·g-1。动力学拟合结果表明,染色质吸附EtBr符合准二级动力学。(4)csDNA和染色质去除EtBr污染物均遵循Langmuir等温线模型,最大理论吸附量分别为76.92 mg·g-1和48.08 mg·g-1。Dubinin-Radushkevich模型拟合结果表明,csDNA和染色质去除EtBr均属于物理吸附。热力学分析结果表明,csDNA和染色质去除EtBr均是以氢键和范德华力为主导力的自发过程。综上所述,优化后的浓盐法是获得高纯度、高质量csDNA的有效方法;从鲤鱼鱼白中提取的csDNA和染色质对选择性去除EtBr污染物有良好的性能。本课题为去除EtBr污染物提供了物美价廉的生物基吸附剂,为高效去除EtBr污染物提供了便捷的方法,同时也为鲤鱼的综合开发提供了新见解。
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