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背景与目的血管性痴呆(vascular dementia,VD)是最常见的非变性病痴呆,由各种脑血管疾病诱发,占痴呆总数15%-20%,仅次于阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)。慢性脑低灌注(Chronic cerebral hypoperfusion,CCH)被认为是脑血管病患者出现痴呆的显著危险因素,可导致脑关键部位(尤其是海马CA1区)缺血缺氧,诱发迟发性神经元损害,进而导致痴呆。因此,探讨CCH的病理生理变化有助于发现VD潜在的治疗靶点。在该病理变化中脑神经元大量丢失,凋亡与自噬共存并相互作用。凋亡是细胞的一种主动性死亡方式,Bcl-2家族凋亡蛋白中Bcl-2蛋白具有抗凋亡作用,而Bax具有促凋亡作用,主要依赖于Bcl-2/Bax比值的变化对凋亡进行调控。自噬是细胞自我吞噬的过程,CCH中脑组织的自噬水平处于激活状态,长期过度自噬可损害神经元,Beclin-1蛋白是目前常用的自噬发生的生物学指标。他汀类药物作为卒中后一级预防药物,它不仅具有降脂、抑制血小板聚集、稳定斑块等作用,还具有抑制凋亡、抗氧化应激、抗炎、调节自噬等作用。不同类型的他汀在不同组织中对自噬的调节作用不同。瑞舒伐他汀(rosuvastatin,ROS)目前在临床上被广泛应用,有研究发现ROS可以改善VD大鼠行为学能力,但其神经保护机制仍未明确,该机制是否与ROS对慢性脑缺血中神经元自噬与凋亡水平的调节有关,目前尚无实验证实。本研究旨在通过检测ROS对VD大鼠学习及记忆能力、海马组织形态学及凋亡与自噬水平的作用,探讨ROS对VD的保护作用及其病理机制,为临床优化用药提供实验依据。材料与方法选取SPF级雄性SD大鼠,11-12周龄,体重250-270g,随机分为4组,分别为:1.假手术+生理盐水组(Sham组);2.假手术+瑞舒伐他汀组(Sham+ROS组);3.VD+生理盐水组(VD组);4.VD+瑞舒伐他汀组(VD+ROS组)。VD模型采用双侧永久性颈总动脉结扎术构建。每组大鼠术后2周开始给予相应试剂处理,瑞舒伐他汀按5mg/kg/d灌胃(按AUC推算,全身暴露量相当于人40mg/d暴露量),生理盐水按等体积灌胃,每天1次,连续用药3周。给药结束后进行Morris水迷宫实验观察各组大鼠的行为学改变,随后取材进行HE染色观察大鼠海马CA1区形态学改变,免疫组化法观察Beclin-1及Bcl-2蛋白在CA1区的表达变化,以及Western Blotting免疫印迹法观察海马组织Bcl-2/Bax比值变化。结果1.ROS对VD大鼠行为学的作用4组大鼠逃避潜伏期及目标象限停留时间百分比均有统计学差异(P<0.01)。Sham组与Sham+ROS组行为学无显著差异(P>0.01)。与前两组相比,VD组逃避潜伏期增加,目标象限停留时间百分比降低(P<0.01)。VD+ROS组较VD组逃避潜伏期缩短,目标象限停留时间百分比增加(P<0.01)。2.ROS对VD大鼠海马CA1区组织形态学的作用Sham组及Sham+ROS组中,两组大鼠海马CA1区细胞结构完整、排列整齐,无明显神经元丢失。VD组与前两组相比,大鼠海马CA1区细胞形态结构不规则、排列疏松,胞核固缩深染、核仁消失,存在明显神经元丢失。VD+ROS组与VD组相比,上述病理学改变有明显改善。3.ROS对VD大鼠海马组织Bcl-2/Bax蛋白比值的作用各组大鼠海马组织Bcl-2/Bax比值有统计学差异(P=0.003),Sham组与Sham+ROS组海马Bcl-2/Bax比值无统计学差异(P=0.966),与前两组比较,VD组海马Bcl-2/Bax比值下降(P<0.01),VD+ROS组较VD组Bcl-2/Bax比值升高(P=0.026)。4.ROS对VD大鼠海马CA1区Bcl-2和Beclin-1蛋白阳性表达的作用Sham组与Sham+ROS组大鼠海马CA1区可见少量Bcl-2和Beclin-1阳性表达,阳性细胞数无统计学差异(P>0.01)。VD组Bcl-2和Beclin-1阳性细胞数较前两组增加(P<0.05)。与VD组相比,VD+ROS组Bcl-2阳性细胞增加,而Beclin-1阳性细胞数减少(P<0.05)。结论1.双侧颈总动脉永久性结扎形成慢性脑低灌注可制备VD大鼠模型,导致大鼠行为学能力降低,瑞舒伐他汀可在一定程度上缓解大鼠的空间学习及记忆障碍;2.慢性脑低灌注可引起海马CA1区神经元发生明显的病理改变,瑞舒伐他汀治疗可一定程度上减轻神经元结构损伤;3.慢性脑低灌注可诱发海马区神经元凋亡及自噬长期过度激活,致使神经元变性坏死。瑞舒伐他汀可抑制缺血损伤所致的神经元凋亡及自噬,促进细胞存活,起神经保护作用。