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目的:本文以双黄连注射剂为研究对象,通过蛋白质组学、酶联免疫、高效液相、双黄连干预法联合筛查双黄连注射剂致敏原成分群载体蛋白,并用质谱鉴定该载体蛋白,有利于充分阐明双黄连注射剂的致敏机理,为其他中药注射剂致敏性成分群的载体蛋白的筛查提供思路。方法:首先将动物致敏获得致敏血清,通过试剂盒测定其IgE水平再通过双向电泳研究致敏血清与空白血清的蛋白质组学差异,初步研究双黄连注射剂对血清蛋白的影响,为下一步研究载体蛋白奠定基础;然后分离血清IgE和IgG,通过酶联免疫联合高效液相的方法,比较口服双黄连与注射双黄连的血清IgE和IgG对双黄连吸附前后的免疫指纹图谱差异,研究双黄连注射剂的致敏性成分;最后通过双黄连干预法筛查双黄连注射剂的载体蛋白,通过比较电泳图谱和薄层扫描图谱条带差异找出差异蛋白,切下差异蛋白并用反透析法洗脱载体蛋白,并根据前述筛查出的致敏性成分用酶联免疫的方法验证所筛查出的载体蛋白,从而验证该筛查思路,最后将蛋白进行NanoLC-ESI-QTOF MS/MS质谱分析,通过查询Mascot数据库鉴定该蛋白质。结果:双向电泳研究表明致敏血清图谱平均蛋白点数为:217±10,与空白血清二维电泳图谱比较,致敏血清图谱共有17个主要差异点,有11个点表达下调,6个点表达上调。酶联免疫联合高效液相结果表明致敏血清IgE和IgG对黄芩苷和绿原酸的吸附性强,而对其他成分的吸附性弱,IgG的特异性无IgE强,而口服双黄连血清IgE和IgG对黄芩苷和绿原酸的吸附性弱。双黄连干预法结果表明孵育前后致敏血清蛋白质条带有明显差异,改用考马斯亮蓝染色将此差异蛋白洗脱后得到有活性的载体蛋白;酶联免疫结果表明此载体蛋白可以与双黄连注射剂,绿原酸,黄芩苷作用,从而验证了所筛查出的载体蛋白,也验证了该筛查思路。通过Mascot查询数据库成功鉴定了5个蛋白质,(?)(?)TRYP_PIG, K2C1PANTR, TRY1RAT, WNT7A AOTTR, CHIT MANSE.结论:双黄连注射剂中黄芩苷和绿原酸为致敏性成分,其载体蛋白可能为TRYP_PIG, K2C1_PANTR, TRY1_RAT, WNT7A_AOTTR, CHIT_MANSE。其致敏机理可能还与超分子机理有关。