基于纳米放大技术检测可卡因及癌细胞中端粒酶的活性

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纳米颗粒具有大的比表面积、高的表面自由能、优良的生物相容性,这些独特的物理和化学性质,使其广泛地应用于敏感分子的固定和信号的检测与放大,显著提高了生物传感器检测的灵敏度。本文的主要内容是将纳米技术、生物条码和核酸分子杂交技术相结合,研制高灵敏度、高选择性的生物传感器。本文主要进行了两个方面的研究和概述:1.基于可卡因核酸适体对目标物的强亲和力和高识别性,研制了一种高灵敏度检测可卡因的化学发光传感器。在可卡因适体的两端分别标记荧光素(Fluorescein,F)和HRP,当溶液中不存在可卡因时,荧光素和HRP离得较远,HRP催化Luminol-H2O2产生的化学发光很难与荧光素之间发生能量转移作用,测得的化学发光强度较弱;存在可卡因时,适体与可卡因发生特异性结合,荧光素和HRP离得较近,荧光素增强Luminol-H2O2-HRP体系的化学发光,根据化学发光强度的增加,实现了对可卡因的定量检测。在选定的最佳实验条件下,化学发光强度增加值与可卡因浓度成正比,并得到了可卡因浓度的线性范围为1.0×10-6~8.0×10-6mol/L,检测限为6.25×10-7mol/L(3σ)。2.构建了一种基于生物条码放大技术进行高灵敏度检测端粒酶活性的电化学传感器。从海拉细胞中提取的端粒酶跟其扩展前体混合进行端粒扩展反应,反应产物跟固定在电极上的捕获DNA和DNA-纳米金复合物上的信号DNA杂交,形成“三明治”结构的复合物。修饰好的电极浸入含六氨基钌的缓冲溶液中,六氨基钌通过静电作用跟DNA-纳米金复合物上的条码DNA结合,通过产生的电化学信号对端粒酶活性进行检测,该方法不需PCR放大就能检测到10个海拉细胞中提取的端粒酶活性。
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