DATS诱导HL-60细胞ROS产生及其对细胞损伤作用

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目的:探讨二烯丙基三硫(diallyl trisulfide,DATS)诱导人急性髓性白血病细胞(HL-60细胞)活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生及其对细胞损伤的作用。方法:用浓度为50、100、150、200μM的DATS处理HL-60细胞0、1、3、6、12、24h;或用NADPH氧化酶特异性阻断剂加拿大麻素(Apocynin)或抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)预孵育HL-60细胞30min后,再用150μM的DATS处理0、1、3、6、12、24h,收集细胞用于下列分析。细胞流式检测HL-60细胞内的ROS水平,NBT还原实验分析NADPH氧化酶活性,丫啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)荧光染色观察细胞凋亡情况,细胞计数检测细胞凋亡率,分光光度计检测细胞质膜氧化产物丙二醛(Maleic Dialdehyde,MDA)与细胞蛋白氧化产物羰基化蛋白(Protein Carbonyl)。结果:不同浓度DATS处理HL-60细胞不同时间后,细胞流式检测显示ROS的产生与DATS处理呈时间剂量依赖关系,在1、3h随着DATS处理时间和浓度的升高而升高,ROS的荧光强度在3h、150μM时达到最高峰,值为63.1±0.120,其后维持在一个较高水平。细胞凋亡率在各浓度3-6h之间有一个明显的上升趋势,12h后趋于平稳。应用Apocynin或是抗氧化剂NAC后,可显著的降低HL-60细胞ROS的产生和凋亡。HL-60细胞的脂质过氧化和羰基化蛋白浓度与DATS诱导ROS产生的趋势基本一致,都在3h、150μM处理点达到最高值,分别为2.711±0.065nmol/mg、10.813±0.586 nmol/mg。结论:1. DATS诱导HL-60细胞产生ROS,NADPH氧化酶是DATS诱导HL-60细胞ROS产生的主要酶系。2. DATS诱导产生的ROS能介导细胞凋亡。3. DATS诱导产生的ROS能损伤HL-60细胞质膜脂质与蛋白质。
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