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目的：
通过建立胰岛素抵抗HepG2细胞模型以及代谢综合征大鼠模型，研究昆丹方对代谢综合征的治疗作用，并通过进一步研究阐明其具体的分子机制，为昆丹方防治代谢综合征提供新的科学依据。
方法：
1、采用胰岛素诱导法成功建立胰岛素抵抗HepG2细胞模型后，分为正常组、模型组、二甲双胍组、昆丹方低剂量组、昆丹方中剂量组和昆丹方高剂量组，共6组。药物处理24小时后，MTT法检测胰岛素抵抗HepG2细胞的存活率，葡萄糖-己糖激酶法检测胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗量，荧光定量PCR法检测胰岛素抵抗HepG2细胞中的AMPKα2、GLUT2、G6Pase和IRS-2mRNA的表达，进一步采用western bloting法检测胰岛素抵抗HepG2细胞PI3K、AMPKα2、p-AMPK(Thr172)、Akt和p-Akt(Ser473)的蛋白表达。
2、采用高脂高糖高盐乳剂灌胃法成功制各代谢综合征大鼠模型后，分为空白组、模型组、二甲双胍组、昆丹方低剂量组、昆丹方中剂量组和昆丹方高剂量组，共6组。药物治疗期间，保持高脂高糖高盐乳剂灌胃处理，药物治疗6周后，检测血清中的TG、TC、LDL-C和HDL-C，并检测血清中的空腹血糖和胰岛素含量，评价胰岛素抵抗情况，HE染色法观察肝组织病理学改变，荧光定量PCR法检测大鼠肝组织中的AMPKα2、GLUT2和G6PasemRNA表达，进一步采用western blotting法检测大鼠肝脏PI3K、AMPKα2、p-AMPK(Thr172)、Akt和p-Akt(Ser473)蛋白的表达。
结果：
1、1×10-9mol·L-1胰岛素作用于HepG2细胞36小时后，HepG2细胞的葡萄糖消耗量明显降低，提示胰岛素抵抗HepG2细胞模型已经成功建立。
2、成功建立胰岛素抵抗HepG2细胞模型后，药物处理24小时，各药物组HepG2细胞生存率均在97％以上，各组之间并没有显著性差异;荧光定量PCR结果显示，与模型组相比，昆丹方能有效提高胰岛素抵抗HepG2细胞的AMPKα2、GLUT2和IRS-2mRNA的表达，降低G6PasemRNA的表达，并提高PI3K、p-AMPK(Thr172)和p-Akt(Ser473)的蛋白表达（P＜0.05），但AMPKα2和Akt总蛋白表达并无显著差异。
3、昆丹方能显著降低代谢综合征大鼠的体重，改善肥胖情况，显著降低代谢综合征大鼠空腹血糖及血清TC、TG、LDL-C的含量，升高血清HDL-C含量;昆丹方还能提高胰岛素敏感性;HE法提示肝组织脂肪变性情况明显减轻;进一步研究发现，昆丹方还能升高代谢综合征大鼠肝脏AMPKα2和GLUT2mRNA表达，降低G6Pase mRNA的表达，western bloting结果显示昆丹方能升高肝组织中PI3K、p-AMPK(Thr172)和p-Akt(Ser473)蛋白的表达。
结论：
1、1×10-9mol·L-1胰岛素作用于HepG2细胞36小时，可建立成熟稳定的胰岛素抵抗HepG2细胞模型。
2、昆丹方组方优化，药物配伍合理，共奏健脾补虚，化痰祛瘀，疏肝理气之效，对于代谢综合征所表现的“虚、痰、瘀”的基本病机有着良好的治疗效果。
3、昆丹方能明显增加胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗能力，其作用机制与上调AMPK和PI3K/AKT信号通路的表达有关。
4、昆丹方能有效抑制代谢综合征大鼠的体重和肥胖，改善代谢综合征大鼠的高血脂和高血糖等症状，提高胰岛素敏感指数，并显著改善代谢综合征大鼠肝脏脂肪变性的程度，其作用机制也与上调AMPK和PI3K/AKT信号通路的表达有关。
通过建立胰岛素抵抗HepG2细胞模型以及代谢综合征大鼠模型，研究昆丹方对代谢综合征的治疗作用，并通过进一步研究阐明其具体的分子机制，为昆丹方防治代谢综合征提供新的科学依据。
方法：
1、采用胰岛素诱导法成功建立胰岛素抵抗HepG2细胞模型后，分为正常组、模型组、二甲双胍组、昆丹方低剂量组、昆丹方中剂量组和昆丹方高剂量组，共6组。药物处理24小时后，MTT法检测胰岛素抵抗HepG2细胞的存活率，葡萄糖-己糖激酶法检测胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗量，荧光定量PCR法检测胰岛素抵抗HepG2细胞中的AMPKα2、GLUT2、G6Pase和IRS-2mRNA的表达，进一步采用western bloting法检测胰岛素抵抗HepG2细胞PI3K、AMPKα2、p-AMPK(Thr172)、Akt和p-Akt(Ser473)的蛋白表达。
2、采用高脂高糖高盐乳剂灌胃法成功制各代谢综合征大鼠模型后，分为空白组、模型组、二甲双胍组、昆丹方低剂量组、昆丹方中剂量组和昆丹方高剂量组，共6组。药物治疗期间，保持高脂高糖高盐乳剂灌胃处理，药物治疗6周后，检测血清中的TG、TC、LDL-C和HDL-C，并检测血清中的空腹血糖和胰岛素含量，评价胰岛素抵抗情况，HE染色法观察肝组织病理学改变，荧光定量PCR法检测大鼠肝组织中的AMPKα2、GLUT2和G6PasemRNA表达，进一步采用western blotting法检测大鼠肝脏PI3K、AMPKα2、p-AMPK(Thr172)、Akt和p-Akt(Ser473)蛋白的表达。
结果：
1、1×10-9mol·L-1胰岛素作用于HepG2细胞36小时后，HepG2细胞的葡萄糖消耗量明显降低，提示胰岛素抵抗HepG2细胞模型已经成功建立。
2、成功建立胰岛素抵抗HepG2细胞模型后，药物处理24小时，各药物组HepG2细胞生存率均在97％以上，各组之间并没有显著性差异;荧光定量PCR结果显示，与模型组相比，昆丹方能有效提高胰岛素抵抗HepG2细胞的AMPKα2、GLUT2和IRS-2mRNA的表达，降低G6PasemRNA的表达，并提高PI3K、p-AMPK(Thr172)和p-Akt(Ser473)的蛋白表达（P＜0.05），但AMPKα2和Akt总蛋白表达并无显著差异。
3、昆丹方能显著降低代谢综合征大鼠的体重，改善肥胖情况，显著降低代谢综合征大鼠空腹血糖及血清TC、TG、LDL-C的含量，升高血清HDL-C含量;昆丹方还能提高胰岛素敏感性;HE法提示肝组织脂肪变性情况明显减轻;进一步研究发现，昆丹方还能升高代谢综合征大鼠肝脏AMPKα2和GLUT2mRNA表达，降低G6Pase mRNA的表达，western bloting结果显示昆丹方能升高肝组织中PI3K、p-AMPK(Thr172)和p-Akt(Ser473)蛋白的表达。
结论：
1、1×10-9mol·L-1胰岛素作用于HepG2细胞36小时，可建立成熟稳定的胰岛素抵抗HepG2细胞模型。
2、昆丹方组方优化，药物配伍合理，共奏健脾补虚，化痰祛瘀，疏肝理气之效，对于代谢综合征所表现的“虚、痰、瘀”的基本病机有着良好的治疗效果。
3、昆丹方能明显增加胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗能力，其作用机制与上调AMPK和PI3K/AKT信号通路的表达有关。
4、昆丹方能有效抑制代谢综合征大鼠的体重和肥胖，改善代谢综合征大鼠的高血脂和高血糖等症状，提高胰岛素敏感指数，并显著改善代谢综合征大鼠肝脏脂肪变性的程度，其作用机制也与上调AMPK和PI3K/AKT信号通路的表达有关。