论文部分内容阅读
膏桐(JatrophaCurcas L.)是一种具有多种用途的麻疯树属类植物,主要用于生产生物柴油。膏桐饼是提炼生物柴油后的副产物,数量庞大,含多种营养成分,但因其具有很强的毒性,限制了其开发利用。本论文的研究目的是分离提纯膏桐饼粕中的致毒成分,探索膏桐饼毒性的化学本质,为脱毒技术的开发提供理论依据;同时,也为膏桐饼中毒性成分的利用提供依据。利用食蚊鱼毒性检测模型进行致毒活性追踪,用硅胶、ODS和凝胶等分离材料和现代分析仪器HPLC、GC-MS、LC-MS、UPLC分离纯化,得到膏桐饼中的单体毒性化合物,综合应用多种波谱学方法(ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、2D-NMR)进行结构解析,并利用食蚊鱼模型测定和评价各单体化合物的致毒活性。从膏桐饼乙酸乙酯萃取物中共分离得到10个化合物,分别鉴定为:8,9-环氧-10-甲氧基-(11E)-十八碳烯酸(化合物1);12-羟基-(10E)-十八碳烯酸(化合物2a)及9-羟基-(10EE)-十八碳烯(化合物2b);12-羰基-(10E)_十八碳烯酸(化合物3a)及9-羰基-(10E)-十八碳烯酸(化合物3b);11-羟基-(9Z)-十八碳烯酸(化合物4a)及8-羰基-(9Z)-十八碳烯酸(化合物4b);11-羰基-(9Z)-十八碳烯酸(化合物5a)及8-羰基-(9Z)-十八碳烯酸(化合物5b);12-甲氧基-(10EE)-十八烯酸甲酯(化合物6a)及9-甲氧基-(10E)-十八烯酸甲酯(化合物6b);9-羟基十八烷酸(化合物7);壬二酸单甲酯(化合物8);Gossweilone(化合物9);1-甘油硬脂酸酯(化合物10)。化合物1为新化合物,化合物2、3、4、5、6是首次从膏桐中分离得到。经食蚊鱼毒性模型检测,化合物1～7、9呈现毒性作用。毒性活性由大到小为:2>3>1>4,5>6,7>9,具有浓度梯度效应和增毒效应。化合物2在50μg/ml浓度下使6条小鱼45min内全部致死。化合物1～7为膏桐饼和油中的主要毒性化合物,该系列毒性化合物毒性与脂肪酸链中出现羟基有关,羟基氧化为羰基后活性略微降低;出现双键后,化合物的毒性活性增加,化合物为反式结构时毒性活性增加幅度较大;双键与羟基邻位时,毒性最强。该系列化合物直接接触人体皮肤会引起荨麻疹症状;接触眼睛会引起眼角膜毛细血管破裂;体外检测具有凝血作用。其中化合物2为该系列毒性化合物的主体成分,约占总毒性成分的40.2%。进一步探究其对小鼠的毒性活性,在3.97*10-3 mol/l浓度下,静脉注射0.05ml给药25g左右小白鼠,小白鼠2min内死亡;灌胃给药小白鼠,显现无毒;纯药涂抹小白鼠皮肤,三天后皮肤出现红肿,两周后出现红斑;纯药尾部皮下注射,两周后尾部坏死。本实验证明了膏桐饼及油中的主要毒性成分不是佛波酯类化合物,而是羟基脂肪酸类化合物,首次发现羟基脂肪酸化合物具有毒性。