采用噬菌体随机12肽库经健康牛血清反复多次预淘选之后,以临床分离的布鲁氏菌阳性混合血清IgG为靶分子,筛选布鲁氏菌抗原表位。3轮生物淘选后,挑取所有得到的噬菌体克隆,提取单链DNA进行测序。运用间接ELISA方法、竞争ELISA方法及Western-bloting方法分别对测序得到的不同噬菌体克隆的亲和力、特异性及反应原性进行鉴定。最终得到两个亲和力高且特异性好的噬菌体克隆,分别命名为P2和P14。将特异性噬菌体P2和P14扩增、纯化,两者等量混合后的溶液稀释至适当浓度作为检测抗原直接包被酶标板,以HRP-山羊抗牛IgG作为二抗,建立牛布鲁氏菌抗体间接ELISA检测方法,对检测方法中的各种反应条件进行了优化,并使用该方法对临床采集血清样本进行了检测。结果显示,该方法特异性好,灵敏度高,与传统虎红平板凝集试验检测方法符合率达到96.7%。以胶体金标记G蛋白制备金标垫,特异性混合噬菌体克隆包被NC膜作为检测线,采用间接法原理组装了布鲁氏菌抗体快速检测免疫层析胶体金试纸条,并对照本实验室建立的间接ELISA方法和虎红平板凝集试验方法对临床血清样品进行了检测,检测符合率分别为96.7%和93.3%,为检测试纸条的进一步研究和应用打下良好的基础。