背景胃癌是世界范围内因肿瘤死亡的第二大原因,为了更好地诊断与治疗胃癌,确定导致该疾病的发展与恶化的基因及其相关机制至关重要。一些研究显示,TRIM29是胃癌的一个重要致癌基因,并且TRIM29 mRNA的过量表达与不良预后和更低的生存率有关。然而,胃癌中TRIM29的作用机制大部分仍不清楚。RNA干扰技术是近些年来发现的一种特异性高且操作简单的基因RNA转录阻断技术。在本研究中,我们试着通过应用Real time qRT-PCR技术、Western-blot技术以及siRNA干扰技术检测患者胃癌组织中TRIM29基因和蛋白质的水平表达变化,从而为阐释胃癌患者中TRIM29表达与临床和预后的关系提供依据。目的1.探讨TRIM29的表达与胃癌患者临床和预后的关系。2.通过siRNA质粒转染,抑制过表达TRIM29的细胞,分析TRIM29在胃癌细胞中的作用机制。3.在裸鼠实验中,通过分析抑制过表达TRIM29细胞的成瘤情况,探讨TRIM29的表达水平变化对胃癌细胞的影响。方法1.收集2010年3月到2015年1月我院收治的胃腺癌患者38例,分为新辅助化疗组(16例)和直接手术组(22例),收集术前胃镜活检标本、标准D2切除手术的胃癌原发灶标本、淋巴结标本及正常胃黏膜,比较上述标本中TRIM29的1nRNA表达和蛋白质水平的变化,分析其原因。2.在不同胃癌细胞株中检测TRIM29 mRNA和蛋白表达水平,挑选过表达的胃癌细胞株,转染siRNA质粒后,使用Real time qRT-PCR和 Westernblot技术检测TRIM29、P53以及B-catenin的表达水平；MTT法检测细胞倍增时间并绘制生长曲线,流式细胞技术分析干扰前后细胞周期的分布。3.选择TRIM29过表达的胃癌细胞,转染siRNA质粒,移植于裸鼠皮下,观察移植肿瘤的大小与生长情况,并检测TRIM29的表达水平变化。结果1. Real-time qRT-PCR 与 Western-blot结果提示胃癌原发灶标本、阳性淋巴结标本中TRIM29 mRNA和蛋白水平表达显著高于正常胃黏膜、阴性淋巴结标本(P均<0.001)。在直接手术组和新辅助化疗组中,TRIM29表达阳性患者的平均生存时间均显著低于TRIM29表达阴性的患者(Log-rank x2=4.068; P=0.044; Log-rank x2=7.487; P=0.006)。TRIM29日性患者新辅助化疗后mRNA的表达水平明显低于化疗前。2.不同胃癌细胞株中TRIM29的nRNA和蛋白质水平均发现有不同程度表达增高。p53的表达在TRIM29阳性表达的不同胃癌细胞株中均出现了明显下调,而B-catenin则出现了异常高表达。RNA干扰后,转染siRNA质粒的胃癌细胞株中TRIM29mRNA和蛋白表达水平降低,显著低于转染空白质粒的细胞。p53基因mRNA及其蛋白表达水平显著高于RNA干扰前,B-catenin基因mRNA及其蛋白表达水平显著低于干扰前。与RNA干扰前相比,TRIM29日性表达的胃癌细胞株在RNA干扰后细胞增殖能力显著降低。3. siRNA质粒转染前TRIM29过表达的胃癌细胞在5只裸鼠皮下生长60天内均出现转移瘤,肿瘤直径大小0.4～1.9cm,而siRNA质粒转染后TRIM29过表达的胃癌细胞在4只裸鼠发现实体肿瘤,直径大小0.1-0.5cm(P<0.001),1只未发现肉眼可见实体肿瘤。TRIM29mRNA和蛋白水平在siRNA质粒转染前TRIM29过表达的胃癌细胞在裸鼠皮下形成的转移瘤中的表达显著高于siRNA质粒转染后。结论1.胃癌患者病理组织中TRIM29的mRNA和蛋白表达水平显著升高；TRIM29表达阳性的患者生存时间更短,预后更差。新辅助化疗可在一定程度上影响TRIM29的表达水平。2TRIM29是通过下调p53,提升β-catenin水平来达到增强肿瘤细胞增殖能力的生物学作用。3.通过裸鼠体内实验进一步证明了TRIM29可提升胃癌细胞的增殖能力。