论文部分内容阅读
目的：本研究拟通过分析鼻咽癌患者和正常人血清miRNA表达谱的差异，筛选鼻咽癌特异性血清miRNA，并对筛选的miRNA进行验证，寻找差异表达的血清miRNA，为鼻咽癌的早期诊断、病情监测以及疾病预后提供实验依据和理论基础，以期找到诊断和治疗鼻咽癌的新思路。方法：第一部分：miRNA芯片筛选鼻咽癌血清表达差异miRNA（1）按照血清采集的标准操作规程收集鼻咽癌患者的血清和正常人血清标本，掌握鼻咽癌患者的基本资料和临床资料。所有患者和志愿者均知情同意并签署知情同意书；（2）使用RNA提取试剂盒提取患者和志愿者的RNA；（3）使用分光光度计测量和评估RNA的纯度和浓度；（4）选择miRCURYTM Array Power试剂盒制备荧光标记探针，并进行芯片杂交和芯片信号扫描；（5）运用GenePix4000B芯片扫描荧光强度，用GenePix pro V6.0软件进行数据处理和分析；结果：（1）收集了自桂林医学院附属医院2011年6月-2012年2月临床病理学确诊的鼻咽低分化鳞癌患者和健康志愿者的血清，初步建立了血清样本库；（2）提取的RNA纯度和浓度检测：提取血清RNA，光密度测定值A260/A280>1.7，说明提取的血清RNA纯度高，RNA量大于10ng符合基因芯片对标本的要求。（3）鼻咽癌患者血清miRNA2倍高于正常人的有54个，5倍高的有22个；2倍低于正常人血清的miRNA有88个，5倍低的有16个。（4）鼻咽癌患者血清EBV相关miRNA2倍高于正常人血清EBV miRNA的有EBV-miR-BART4，EBV-miR-BART18-3p，EBV-miR-BART19-5和EBV-miR-BART21-3p等4个。第二部分：实时荧光定量PCR鉴定miRNA芯片筛选的鼻咽癌血清中高表达的EBV相关miRNA（1）鼻咽癌组织与鼻咽粘膜炎组织miRNA的提取。（2）实时荧光定量PCR反应。（3）血清miRNA提取。（4）miRNA逆转录反应（CDNA的合成）。结果：血清miRNA可能与鼻咽癌的发生密切相关。结论：（1）鼻咽癌患者血清miRNA2倍高于正常人的有54个，5倍高的有22个；2倍低于正常人血清的miRNA有88个，5倍低的有16个。（2）鼻咽癌患者血清EBV相关miRNA2倍高于正常人血清EBVmiRNA的有EBV-miR-BART4，EBV-miR-BART18-3p，EBV-miR-BART19-5和EBV-miR-BART21-3p等4个。（3）血清miRNA可能与鼻咽癌的发生密切相关。