肝纤维化(Liverfibrosis)指的是肝脏慢性损伤后，肝脏内纤维组织异常增生，在组织损害持续或修复过程中形成肉芽组织，此后细胞成分减少而纤维组织增加，导致肝脏病理学上的一系列改变。我国是肝炎肝硬化高发区，晚期肝硬化患者大部分死于其并发症，而胆囊病变是其中严重的并发症，目前临床上常碰到一部分肝硬化病人合并胆囊病变，特别是晚期肝硬化合并有急性胆囊炎、慢性胆囊炎、胆囊结石等，在治疗上往往存在许多矛盾，手术风险极大等难题。而肝纤维化作为肝硬化发展的必经阶段的病理过程，其进展至肝硬化过程中是否存在同步的胆囊功能病理组织学的改变。以及两者在病理状态下的相互关系、相互影响，尤其是胆囊病变有否促进肝硬化的发展，胆囊切除术后肝功能变化、肝硬化的转归机制及学说并不明确，为了更好地防治肝硬化合并胆囊病变，有必有对其发生、发展、转归机理作一研究。因而建立肝纤维化、肝硬化合并胆囊病变动物模型显得很有必要。目前国内外尚无建立此类模型成熟稳定的方法。 目的：1在体重监测下观察硫代乙酰胺(TAA)诱导豚鼠肝纤维发展过程的稳定性及可行性，观察豚鼠对TAA毒性作用的耐受性及易感性。体重变化与肝纤维化成模是否存在关系，体重监测在成模过程中的作用。为进一步建立成模率高、病理变化稳定的肝硬化合并胆囊病变模型提供简便、无创、经济的监测手段。 2分析豚鼠肝脏病理纤维化分级与血清纤维化指标水平是否存在相关性，为豚鼠肝硬化模型建立提供适用的监测手段及提供理论依据。 3初步观察肝纤维化过程中胆囊出现的病理变化，为肝硬化合并胆囊病变模型研究作前期探索。 材料和方法：1取体重在250-300g(约3-4周龄)健康雄性豚鼠50只，随机分成两组：对照组10只；实验组40只(其中TAA作用模型六周组20只，作用模型九周组20只)。5只/笼分笼饲养。对照组、实验组均予豚鼠基础饲料，不限量供应。对照组不限量供应750mg/LVitC饮用水；实验组予含浓度为0.03％TAA+750mg/LVitC饮用水诱导并不限量供应，配制后Ph值应为6.7～7.2，保证TAA的化学稳定性。各组饮用水每两天配制更换。 2体重监测：每周同一天同一时段测体重。 3血清、肝脏、胆囊取材保存3.1饲养第七周末、第十周末用同法处理模型六周组、模型九周组与对照组，利用乙醚吸入麻醉后体外心脏穿刺采血(3-5ml)，剖腹后肝脏下缘上翻，靠近胆总管结扎胆囊管，再游离切断肝脏血管及与周围组织器官韧带，完整取出肝脏及胆囊，不结扎肝脏相关离断血管放血处死。离体解剖分离肝脏、胆囊。肝组织取自肝右外侧叶1.5×1.5×0.3cm3大小固定在10％甲醛固定液中，用于常规伊红-苏木素(HE)染色，Masson三色染色、Gomori银染色法。根据肝组织内纤维组织增生状况分为5级：(S0无纤维化；S1门管区纤维化扩大，局限窦周及小叶内纤维化；S2门管区周围纤维化，伴纤维间隔形成，小叶结构保留；S3纤维间隔伴小叶结构紊乱，无肝硬化；S4早期肝硬化。)。统计各组各个体肝纤维化程度。 3.2胆囊常规HE染色，观察胆囊病理改变及外观情况。4血液标本4000rpm离心15min，取其血清600ul置于-20℃冰箱保存备检。采用放射免疫分析法测定各标本透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(ⅣC)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)血清值。严格按各试剂盒使用说明书操作，由SN-697全自动双探头放射免疫γ计数器测沉淀物放射性计数。5统计分析：所得数据用均数±标准差(-x±s)表示。用SPSS11.0软件进行多组资料t检验、相关分析、Fisher精确检验法，P＜0.05即认为差异有显著的统计学意义。 结果：1体重监测1.1第一周体重：对照组、实验组按正常生理变化规律体重逐渐上升，体重增加平稳。 1.2第二周后(实验组予TAA一周后)：对照组体重按生理规律体重变化逐渐上升，体重增加平稳，豚鼠毛发顺畅光泽好、食欲正常、活动正常。实验各组：体重明显下降，幅度最大者超过80g，豚鼠毛发出现蓬松、食欲不振下降、活动减少，尤以体重变化大者为甚。第三、四周后体重缓慢回升，以后呈小幅度升降，个别逐渐上升。豚鼠毛发色泽、食欲、活动逐渐好转。 1.3对照组与实验组组间体重均数比较：第二周：模型六周组、模型九周组VS对照组，P＞0.05，各组间体重均数比较差异无统计学意义。第七周：模型六周组、模型九周组VS对照组，P＜0.05，对照组与实验模型各组比较差异有显著的统计学意义。模型六周组VS模型九周组，P＞0.05，实验模型组间差异无统计学意义。各实验组内个体体重变化存在差异。 2HA、LN、ⅣC、PCⅢ血清值2.1对照组：HA(250.71±72.37μg/L)、LN(35.39±10.01μg/L)、ⅣC(6.21±3.08μg/L)、PCⅢ(2.86±1.94μg/L)；模型六周组：HA(233.64±67.62μg/L)、LN(44.61±12.88μg/L)、ⅣC(8.52±2.40μg/L)、PCⅢ(87.49±32.95μg/L)；模型九周组：HA(85.59±35.99μg/L)、LN(40.90±8.44μg/L)、ⅣC13.40±1.93μg/L)、PCⅢH(158.68±41.73μg/L)。 2.2Ⅳ型胶原值、Ⅲ型前胶原值均数比较：对照组、模型六周组、模型九周组相继递增，各组间t检验P＜0.05，差异有显著的统计学意义；透明质酸值均数比较：对照组、模型六周组、模型九周组相继下降，各组间t检验P＜0.05，差异有显著的统计学意义；层粘蛋白值均数比较：对照组、模型六周组、模型九周组变化不大，各组间t检验P＞0.05，差异无统计学意义。 3肝脏组织病理改变与纤维化分级3.1大体观察：对照组肝脏质地软、红润，实验组肝脏颜色不同程度变深，浅褐色，质地稍韧。 3.2显微镜观察：3.2.1对照组：肝细胞、肝细胞索、肝小叶结构正常。在门管区和小叶中央静脉有少量的胶原纤维。 3.2.2模型六周组：出现斑片状肝细胞坏死区，坏死区有较多炎性细胞浸润，自门静脉周围向外蔓延，并有中央静脉周围少量炎性细胞的浸润，肝细胞核稍增大；炎症反应进一步加重；肝细胞坏死区见大量的淋巴细胞，伴有肝细胞脂肪样变；胶原纤维间隔增生明显，胶原纤维从门管区处往外延伸到邻近门管区及肝小叶内。 3.2.3模型九周组：炎症反应进一步加重，门管区、中央静脉大量淋巴细胞浸润，门管区间出现桥接坏死，肝小叶结构紊乱，部分中央静脉变窄、偏位、缺如，门管区内纤维组织增生，出现粗大的纤维间隔，部分标本可见形成假小叶。 3.2.4纤维化形成统计：S0：(对照组10例)S1：(模型六周组4例)S2：(模型六周组14例；模型九周组5例)S3：(模型六周组1例；模型九周组9例)S4：(模型九周组2例) 4肝纤维化分级与肝纤维化血清指标的相关性4.1Ⅳ型胶原值与肝纤维化分级呈正相关，相关系数R=0.572，p＜0.01，纤维化程度越高Ⅳ型胶原值越大。 4.2Ⅲ型前胶原值与肝纤维化分级呈正相关，相关系数R=0.910，p＜0.01，纤维化程度越高透明质酸值越大。 4.3透明质酸值与肝纤维化分级呈负相关，相关系数R=-0.574，p＜0.01，纤维化程度越高透明质酸值越小。 4.4层粘蛋白值与肝纤维化分级无明显相关性。相关系数R=0.087，p＞0.05。5胆囊病理观察 5.1大体观察：对照组胆囊壁表面光滑，血管稀疏，无扩张，胆汁较透明。实验模型组胆囊壁表面有部分隆起，血管明显增多，胆汁混浊。 5.2病理改变按慢性胆囊炎病理分级结果：(1)、模型六周组：轻度11例，中度例6例，无明显改变2例。(2)、模型九周组：轻度3例，中度6例，重度7例。 结论：1本实验表明豚鼠对TAA药物毒性反应有很好的耐受性和易感性，经饮用水摄入TAA可以作为一种简便、无创、经济、适宜的方法应用于豚鼠肝纤维化、肝硬化诱导过程。体重监测是一种无创、安全、有效的监测手段。 2PC-Ⅲ、Ⅳ-C血清水平与豚鼠肝纤维化发展程度有很好的相关性，PC-Ⅲ、Ⅳ-C水平可作为豚鼠肝纤维化血清评价指标。LN、HA血清水平与其他实验及临床结论相悖，需进一步研究。 3本实验模型豚鼠肝纤维化病理变化及胆囊病理变化结果，初步表明诱导豚鼠肝纤维化过程中胆囊已出现早期病变，其机制复杂，有必要在本实验基础上建立肝硬化和胆囊病变实验模型进一步探讨。