论文部分内容阅读
目的:内脂素(visfatin)是一种新发现的在肥胖和2型糖尿病(Type2diabetesmellitus,T2DM)患者血浆中浓度普遍升高的脂肪细胞因子,具有类胰岛素样的降糖作用,但具体降糖机制目前并不是十分清楚,可能会在糖尿病的药物治疗方面成为一个具有潜在应用价值的作用靶点。对分别采用普通饲料和高脂饲料喂养联合链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱导的T2DM模型大鼠腹腔注射内脂素重组蛋白干预后,观察内脂素对骨骼肌组织中磷酯酰肌醇3激酶(Phosphoinositide3-kinase,PI3K)和葡萄糖转运蛋白4(Glucose transporter-4,GLUT4)表达的影响,探讨其降糖机制是否与PI3K信号途径相关。方法:1、实验动物分组及建立T2DM模型健康6周龄雄性Wistar大鼠80只,随机分为普饲组(N组)、高饲组(H组)、普通饲料糖尿病模型组(N+S组)和高脂饲料糖尿病模型组(H+S组)。糖尿病模型组大鼠腹腔注射2%STZ45mg kg-1造模。造模72h后,大鼠断尾采血,自动血糖仪测血糖,观察血糖持续高于16.7mmol L-1为造模成功。成模8w后,将N+S组和H+S组糖尿病大鼠分别随机分出一组给予腹腔注射内脂素重组蛋白干预,称为内脂素干预的普通饲料糖尿病模型组(V+N+S组)和内脂素干预的高脂饲料糖尿病模型组(V+H+S组)。2、实验动物干预方法及取材在实验结束时,V+N+S组和V+H+S组大鼠腹腔注入大鼠内脂素重组蛋白4μg Kg-1干预。采用血糖仪测定大鼠干预前后的尾静脉血糖水平。腹主动脉采血后,迅速将血分别转入肝素钠抗凝的离心管中,混匀后室温离心分离血浆。同时取股四头肌组织冻存于-70℃冰箱内。3、指标检测1)空腹血糖(Fasting plasma glucose,FPG)、空腹胰岛素(Fasting plasma insulin,FINS)测定:分别采用葡萄糖氧化酶法和酶联免疫吸附法测定腹主动脉血FPG和FINS水平,并计算出胰岛素敏感指数(Insulin sensitivity index,ISI),公式如下,ISI=ln(1/FPG×FINS)。2)骨骼肌组织GLUT4和PI3K蛋白表达水平测定:采用Western Blotting技术检测。3)骨骼肌组织GLUT4mRNA表达水平测定:采用实时定量RT-PCR技术检测。4、统计学方法实验结果采用SPSS17.0统计软件进行统计分析,各项实验数据结果以x±s表示,计量资料自身对照采用配对设计资料的t检验,多组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),不符合正态分布的实验数据转化为自然对数后进入统计,以P<0.05为差异有统计学意义。结果:1、各组大鼠FPG、FINS和ISI的比较V+N+S组和V+H+S组干预后与干预前尾静脉FPG水平比较均降低(P<0.05)。与N组腹主动脉血FPG水平比较,H组无明显变化(P>0.05),其余各组均增高(P<0.05)。与H组比较,H+S组和V+H+S组FPG水平均增高(P<0.05)。V+N+S组与N+S组,V+H+S组与H+S组比较FPG水平均下降(P<0.05)。与N组比较,各组FINS水平无显著差异(P>0.05)。与N组ISI比较,H组无明显变化(P>0.05),其余各组均降低(P<0.05)。与H组ISI比较,H+S组和V+H+S组均降低(P<0.05)。V+N+S组与N+S组,V+H+S组与H+S组比较ISI均有所增高(P<0.05)。2、各组大鼠骨骼肌组织GLUT4和PI3K的蛋白表达水平与N组GLUT4和PI3K蛋白表达水平比较,H组无明显变化(P>0.05),其余各组均明显降低(P<0.05)。与H组GLUT4和PI3K蛋白表达水平比较,H+S组和V+H+S组明显降低(P<0.05)。V+N+S组与N+S组,V+H+S组与H+S组比较GLUT4和PI3K蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。3、各组大鼠骨骼肌组织GLUT4mRNA的表达水平与N组骨骼肌组织细胞GLUT4mRNA表达量比较,H组无明显变化(P>0.05),其余各组均明显降低(P<0.05)。与H组骨骼肌组织细胞GLUT4mRNA表达量比较,H+S组和V+H+S组明显降低(P<0.05)。V+N+S组与N+S组,V+H+S组与H+S组比较骨骼肌组织细胞GLUT4mRNA的表达均升高(P<0.05)。结论:内脂素可以通过上调T2DM大鼠骨骼肌组织PI3K信号转导途径中的关键蛋白PI3K蛋白的表达而增加GLUT4mRNA表达,导致GLUT4的蛋白表达增加,从而降低血糖水平。