【摘 要】
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本研究从感染马铃薯卷叶病毒(PLRV)的马铃薯叶片中提取出病毒RNA进行cDNA合成并运用RT-PCR技术进行体外扩增,得到了符合理论设计的PCR扩增产物,将这些产物正反向插入到经改造
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本研究从感染马铃薯卷叶病毒(PLRV)的马铃薯叶片中提取出病毒RNA进行cDNA合成并运用RT-PCR技术进行体外扩增,得到了符合理论设计的PCR扩增产物,将这些产物正反向插入到经改造的适合转化马铃薯的双元载体RNA干涉区,成功构建了马铃薯卷叶病毒RNA干涉载体。主要研究结果如下:(1)利用Trizol法直接从感PLRV的马铃薯叶片中提取了PLRV总RNA;(2)通过分析马铃薯卷叶病毒基因组序列,设计了6对引物。RT-PCR扩增出5对引物的产物,大小分别为240bp、270bp、360bp、380bp、400bp;(3)对质粒载体pFGC5941和pCAMBIA1300重组。重组质粒pCADS1341用EcoRI/PstI酶切鉴定,能够切出大小为3.5kb和8.9kb的两条特异性的条带,证明了适合马铃薯转化的RNA干涉诱导载体构建的正确性;(4)扩增出的片段正反向两次插入质粒载体pCADS1341,经酶切鉴定,得到3个RNA干涉载体,分别命名为pCADS1341-PLRV1、pCADS1341-PLRV2、pCADS1341-PLRV3。
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