目的:通过体外分离原代大鼠卵巢颗粒细胞(granulosa cells,GC)探讨中药木尼孜其含药血清对顺铂(cisplatin,CDDP)诱导卵巢GC损伤作用的影响。方法:(1)制备含药血清:随机将50只雌性SD大鼠分为五组:空白对照组、戊酸雌二醇(阳性对照)组、木尼孜其高剂量组、木尼孜其中剂量组、木尼孜其低剂量组,连续早晚灌胃四天,第五天采血并分离血清;(2)分离并鉴定卵巢GC:随机选取10只雌性SD大鼠,先用机械法后用胰蛋白酶法处理,合并分离出的卵巢GC,制备细胞爬片,HE染色法观察形态,用特异性促卵泡生成素受体(follicular stimulating hormone receptor,FSHR)通过免疫细胞化学法进行鉴定;(3)绘制卵巢GC生长曲线;(4)配制5%,10%,15%,20%的木尼孜其含药血清,用MTT法筛选最适浓度;(5)配制0μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、8μg/ml浓度的CDDP溶液,结合MTT法及结晶紫染色法确定损伤模型的浓度及损伤时间;(6)根据木尼孜其含药血清及CDDP最佳反应浓度,将卵巢GC按空白对照组、CDDP模型组、戊酸雌二醇组、木尼孜其高剂量、木尼孜其中剂量、木尼孜其低剂量进行分组;(7)MTT法观察木尼孜其对CDDP诱导卵巢GC增殖率的影响;(8)酶联免疫吸附法检测各组细胞上清中抗苗勒氏管激素(anti-mullefian hormone,AMH)和雌二醇(estradiol,E2)的水平;(9)RT-q PCR法检测各组TGF-β1、Smad2、Smad3的m RNA表达量;(10)Western Blot法检测各组TGF-β1、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3的蛋白表达量。结果:(1)HE染色结果提示,细胞形态符合卵巢GC的特点,免疫细胞化学法鉴定纯度是90.51%;(2)随着木尼孜其含药血清浓度的增加卵巢GC增殖率不断升高,其中含15%血清干预的各组细胞增殖率在48h时升高最为明显(P<0.05);(3)CDDP损伤卵巢GC后,各组细胞增殖率均明显降低(P<0.05),细胞形态明显损伤,综合MTT法和结晶紫染色结果,确定损伤浓度为5μg/ml,损伤时间为48h;(4)与CDDP模型组相比,木尼孜其高剂量组含药血清干预48h后卵巢GC增殖率升高最为显著(P<0.01);(5)ELISA法结果提示,与CDDP模型组相比,阳性对照组及木尼孜其各剂量组AMH、E2含量有不同程度的增加,尤以木尼孜其高剂量组增加最为显著(P<0.01);(6)RT-q PCR结果提示,与CDDP模型组相比,阳性对照组及木尼孜其各剂量组TGF-β1 m RNA表达量均明显增加(P<0.05),阳性对照组及木尼孜其高剂量组最为显著;阳性对照组Smad2的表达量增加(P<0.01),木尼孜其各剂量组Smad2及Smad3表达量有增加趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);(7)Western Blot法结果提示,与CDDP模型组相比,阳性对照组及木尼孜其各剂量组TGF-β1,p-Smad2,p-Smad3的蛋白表达量均不同程度升高(P<0.05),木尼孜其高剂量组表达量升高最为显著。结论:中药木尼孜其可促进顺铂损伤后卵巢GC的增殖并改善其分泌功能,其药理作用机制可能与促进卵巢GC中TGF-β1的表达及Smad2、Smad3磷酸化有关。