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目的:糖尿病(diabetes mellitus, DM)作为一种人们熟知的代谢性疾病,随着国家的发展以及人们生活方式的改变,已经成为导致人类死亡的第三大原因。糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)作为糖尿病眼部病变最严重的并发症,导致了每年不可逆的视力丧失的人数持续上升。其中老年黄斑变性(age-related macular degeneration,AMD)成为老年人群视力丧失的最常见原因,在65岁以上的老年人中,每3个人中就会有一个受到AMD的影响。而国内外许多实验研究以及临床试验都显示:氧化应激以及炎症已经成为AMD发生发展的两大非常重要的原因。而视网膜本身也容易受到氧化应激的影响,原因是代谢旺盛的视网膜的氧消耗量远远高于机体其他任何组织,多不饱和脂肪酸易被氧化且会激发具有细胞毒性的连锁反应。当前已经有大量的研究显示:应用高糖培养基刺激视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial, RPE),模拟糖尿病时RPE细胞在体内的高糖环境,造成细胞的氧化应激状态,并应用药物进行干预,结果显示高糖使细胞的活力下降,使一些细胞因子、炎性因子的表达发生变化,对RPE细胞造成损伤。本实验应用不同浓度的八肽胆囊收缩素(Cholecystokinin octapeptide,CCK-8)作用于高糖培养的大鼠RPE细胞,培养48小时后,MTT法检测细胞活力以及NRF2、SOD1、γ-GCS、NQO1、TNF-α、IL-1α、及IL-6的表达的变化,根据结果筛选出CCK-8合适的治疗浓度,观察此浓度作用RPE细胞24小时、48小时及72小时上述因子的表达变化。方法:1筛选CCK-8治疗浓度:培养大鼠RPE细胞,取对数生长期细胞进行实验,随机分为8组:①正常对照组(葡萄糖浓度:5.56mmol/L)②高糖组(葡萄糖浓度:30mmol/L)③高渗对照组(葡萄糖浓度:5.56mmol/L+甘露醇:24.44mmol/L)④高糖+CCK-8治疗组(葡萄糖浓度:30mmol/L+CCK-8浓度:10-5mmol/L)⑤高糖+CCK-8治疗组(葡萄糖浓度:30mmol/L+CCK-8浓度:10-6mmol/L)⑥高糖+CCK-8治疗组(葡萄糖浓度:30mmol/L+CCK-8浓度:10-7mmol/L)⑦高糖+CCK-8治疗组(葡萄糖浓度:30mmol/L+CCK-8浓度:10-8mmol/L)⑧高糖+CCK-8治疗组(葡萄糖浓度:30mmol/L+CCK-8浓度:10-9mmol/L),各组细胞应用同种培养液培养24小时后换成条件培养液,继续培养48小时,倒置显微镜下观察细胞形态,应用MTT法检测不同浓度CCK-8对细胞活力的影响,同时收集细胞标本,进行RT-PCR实验,检测NRF2、SOD1、γ-GCS、NQO1、TNF-α、IL-1α、IL-6表达的变化。2不同时间段CCK-8治疗浓度10-6mmol/L相关因子变化:根据MTT及RT-PCR的结果得出CCK-8的治疗浓度为10-6mmol/L,再次分组:①正常对照组(葡萄糖浓度:5.56mmol/L)②高糖组(葡萄糖浓度:30mmol/L)③高渗对照组(葡萄糖浓度:5.56mmol/L+甘露醇:24.44mmol/L)④高糖+CCK-8治疗组(葡萄糖浓度:30mmol/L+CCK-8浓度:10-6mmol/L),各组细胞分别培养24小时、48小时、72小时,取相应时间段细胞标本进行RT-PCR检测上述7种因子表达。结果:1MTT法检测结果:与正常对照组比较,高糖组细胞的活力明显降低(P<0.05),高渗对照组细胞活力未见明显改变;各不同浓度治疗组的细胞活力低于正常对照组,具有明显差异(P<0.05),CCK-8浓度为10-7mmol/L、10-8mmol/L、10-9mmol/L三组之间细胞活力无明显差异,三组与高糖组相比无明显差异,CCK-8浓度为10-6mmol/L与10-5mmol/L两组之间细胞活力无明显差异,但要高于其他三组治疗组和高糖组(P<0.05)。2筛选CCK-8治疗浓度阶段RT-PCR结果:与正常对照组比较,高糖组NRF2、SOD1、γ-GCS、NQO1、TNF-α、IL-1α、IL-6的表达上升(P<0.05),高渗对照组的表达未见明显差异。各不同浓度治疗组与正常对照组相比,其中NRF2、SOD1、γ-GCS及NQO1的表达明显上升(P<0.05),TNF-α、IL-1α及IL-6的表达明显下降(P<0.05)。与高糖组相比,CCK-8浓度为10-7mmol/L、10-8mmol/L、10-9mmol/L三组中NRF2、SOD1、γ-GCS及NQO1的表达上升(P<0.05),TNF-α、IL-1α及IL-6的表达下降(P<0.05),但是三组之间未见明显差异。CCK-8浓度为10-6mmol/L与10-5mmol/L两组之间未见明显差异,但与其他三组治疗组及高糖组相比,NRF2、SOD1、γ-GCS及NQO1的表达明显上升(P<0.05),TNF-α、IL-1α及IL-6的表达明显下降(P<0.05)。3不同时间段CCK-8治疗浓度10-6mmol/L相关因子变化:与正常对照组相比,高渗对照组7因子的表达未见明显差异;高糖组与正常对照组及高渗对照组相比,上述7种因子的表达明显上升(P<0.05);与高糖组相比,治疗组NRF2、SOD1、γ-GCS及NQO1表达明显上升(P<0.05),48小时高于24小时及72小时(P<0.05),24小时及72小时之间无明显差异;与高糖组相比,治疗组TNF-α、IL-1α及IL-6表达下降(P<0.05),72小时的表达低于24小时和48小时(P<0.05),24小时和48小时间的表达无明显差异。结论:1高糖环境可导致大鼠RPE细胞损伤,细胞活力降低。210-6mmol/L浓度的CCK-8以及一定的作用时间后可以抑制高糖对细胞带来的损伤,使NRF2、SOD1、γ-GCS及NQO1表达明显上升,TNF-α、IL-1α及IL-6的表达明显下降,提示了CCK-8可能通过抗氧化作用以及抗炎症作用维持了细胞内平衡状态,保护大鼠RPE细胞。为CCK-8在临床中的应用奠定了实验基础。