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Harpin是革兰氏阴性植物病原细菌产生的具有非寄主专化性激发子功能的蛋白质,其编码基因为hrp基因簇成员。Harpin类激发子具有相似的生化特征:富含甘氨酸(Gly),不含半胱氨酸(Cys),热稳定,对蛋白酶敏感。Harpin具有显著的诱导植物抗虫、抗病、抗旱和促进植物生长发育等多种生物学效应。本研究旨在研制新型Harpin蛋白泡腾片剂型,检测泡腾片剂型的稳定性和生物学活性,以及研究该剂型防治玉米细菌新病害的防治效果,为Harpin蛋白生物农药的应用提供基础。在本实验中,用0.1mM的IPTG来诱导重组菌株BL21/pET30a(+)-hrf2表达Harpin蛋白,经直接煮沸破碎法和超声波破碎法两种不同方法获得Harpin粗蛋白溶液。对经超声波破碎法获得的粗蛋白溶液进行脱盐提纯处理,获得纯蛋白。将Harpin粗蛋白和纯蛋白进行超低温冷冻干燥后,采用酸碱分开制粒压片法制成粗蛋白泡腾片和纯蛋白泡腾片。通过三个不同时期对纯蛋白Harpin泡腾片和粗蛋白Harpin泡腾片的蛋白浓度和蛋白活性的检测发现,纯蛋白Harpin泡腾片的效果远不如粗蛋白Harpin泡腾片,可能与Harpin纯蛋白压成泡腾片后吸湿严重,导致蛋白降解有关。故在后期的防治效果检测中,我们只使用了 Harpin粗蛋白泡腾片进行了防治效果的检测。研究中发现,我们从河北四个地区(武邑、献县、阜城和永年)采集到的玉米病害植株中分离得到了 3种主要细菌,根据16s rDNA的比对结果鉴定为Pantoea ananatis、Pantoea dispersa和Pantoea aglomerans,而根据gyrB基因的比对结果鉴定为Pantoea ananatis和 Pantoea disprsa,目前还未报道由 Pantoea disprsa引起的玉米病害。根据科赫氏法则的验证步骤,证明了分离得到的Pantoea ananatis和Pantoea dispersa为河北玉米新病害的致病菌。且温室实验发现Pantoea disprsa较Pantoea ananatis能够引起更加严重的玉米病害。为了防治该新病害,在研究Harpin蛋白泡腾片对玉米病害的防治效果时,只研究了 Harpin粗蛋白泡腾片对Pantoea dispersa的防治效果。防治效果实验中,采用清水处理作为对照。结果显示:粗蛋白Harpin泡腾片(50ug/ml)对该玉米新病害有着较好的防治效果,防治效果可达到37.5%。