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宫颈癌是全世界发病率排名第二的女性恶性肿瘤，在女性的恶性肿瘤中发病率仅次于乳腺癌，而且发病年龄有年轻化的趋势，该疾病严重威胁着女性的健康[1]。上皮间质化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是指具有极性的上皮细胞转换成为具有移行能力的间质细胞并获得侵袭和迁移能力的过程[2]。研究表明，在肿瘤侵袭和转移的早期阶段，肿瘤上皮细胞发生上皮间质转变，逆转或抑制EMT可抑制肿瘤上皮细胞的侵袭和转移能力。诱导上皮细胞发生EMT可增加肿瘤细胞的移行能力[3,4]。大量的研究证实,肿瘤细胞在侵袭和转移的过程中存在上皮间质变，它是恶性肿瘤转移侵袭的关键性步骤[5,6]。巨噬细胞移动抑制因子(macrophagemigration inhibitory factor,MIF)是多效能的细胞因子，在炎症反应、免疫应答反应及肿瘤发生发展过程中起着重要作用。目前认为，MIF是重要的肿瘤促进因子，与多种肿瘤的侵袭、转移、临床分期及预后密切相关[7]。有研究发现MIF通过诱导EMT的发生从而增强胰腺癌的侵袭性[8]。基于以上研究，探讨MIF与宫颈癌发生发展的关系，并分析MIF对宫颈癌SiHa细胞上皮间质转化的影响，为宫颈癌的早期诊断提供新的理论依据，为宫颈癌的个性化治疗寻找一条新的途径。目的:通过RNA干扰技术沉默人宫颈癌SiHa细胞巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的表达,在基因水平和细胞水平研究MIF对对宫颈癌SiHa细胞上皮细胞-间质转化（EMT)相关因子E-cadherin、Vimentin、Snail表达的影响，以及对SiHa细胞生物学特性的影响，探讨MIF在宫颈癌早期阶段发生浸润转移的作用机制。方法：1.构建重组真核表达载体pGenesil-1-MIF siRNA，应用Hind III、EcoRI双酶切鉴定。脂质体法将重组真核表达载体pGenesil-1-MIF siRNA转染至SiHa细胞中，荧光显微镜观察转染情况；Real-time PCR法检测转染前后各组细胞中MIFmRNA表达情况。2.Real-time PCR和免疫细胞化学法检测各组细胞中E-cadherin、Vimentin、Snail mRNA和蛋白的表达,从基因水平和细胞水平分别研究MIF对宫颈癌SiHa细胞上皮细胞间质化各因子表达水平的影响。3.通过CCK-8、Boyden小室趋化迁移实验观察MIF沉默对SiHa细胞生物学特性的影响。结果：1.经过酶切鉴定证实重组质粒pGenesil-MIF siRNA成功。将重组质粒pGenesil–MIF siRNA以脂质体为介导转入SiHa细胞，荧光显微镜下6h左右可观察到少量绿色荧光，可证实转染成功，荧光强度在转染后48h左右最强，选取10个200倍视野，计数发出绿色荧光的细胞数和总细胞数。转染效率约为(61士2．0)%。构建并转染至SiHa细胞。Real-time PCR结果显示SiHa-pGenesil–MIFsiRNA组细胞的MIF mRNA相对表达量明显减少（P<0．05)。2.使用R-T PCR实验、免疫细胞化学实验结果表明SiHa-pGenesil–MIFsiRNA组E-cadherin mRNA和蛋白表达水平明显高于其余两组细胞，而Vimentin、Snail、MIF mRNA和蛋白表达水平明显低于其他两组细胞。3.使用Boyden小室实验结果表明：穿膜7h左右，实验组细胞、阴性对照组细胞、空白对照组细胞在荧光显微镜下平均每个视野下穿过滤膜的细胞数分别为（53.574±3.431）个、49.450±4.862）个、23.074±3.929）个。SiHa-pGenesil–MIFsiRNA组与SiHa-pGenesil–1组、SiHa组相比，差异均有统计学意义（P﹤0.01）而SiHa-pGenesil–1组与SiHa组相比，差异无统计学意义（P﹥0.05）。CCK-8法结果显示：12h时SiHa-pGenesil–MIF siRNA组与SiHa-pGenesil–1组、SiHa组相比增殖作用的差异无统计学意义(P>0．05)。24h、48h、72h、96h时SiHa-pGenesil–MIF siRNA组与SiHa-pGenesil–1组、SiHa组相比增殖作用显著减慢(P<0．01)且转染后所用培养时间越长，其抑制增殖的作用越明显；而SiHa-pGenesil–1组与SiHa组相比差异无统计学意义（P>0.05)。结论:1.抑制MIF表达的pGenesil-MIF siRNA重组真核表达载体构建成功，转染重组真核表达载体pGenesil-MIF siRNA后SiHa细胞中MIF表达降低。2.MIF沉默可上调E-cadherin的表达水平，下调Vimentin、Snail的表达水平。3.MIF沉默通过抑制EMT发生，从而抑制宫颈癌的侵袭与转移能力。