【摘 要】
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产酯酶的不动杆菌CGMCC0789整体细胞能催化(R)-环戊烯酮乙酸酯的对映选择性水解反应,可用于制备拟除虫菊酯手性中间体(S)-环戊烯酮.该文将不动杆菌CGMCC 0789细胞包埋于海藻
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产酯酶的不动杆菌CGMCC0789整体细胞能催化(R)-环戊烯酮乙酸酯的对映选择性水解反应,可用于制备拟除虫菊酯手性中间体(S)-环戊烯酮.该文将不动杆菌CGMCC 0789细胞包埋于海藻酸钙,优化了固定化的条件;研究了固定化细胞的催化特性,并与游离细胞进行了对比.结果表明:以Tween-80为乳化剂时,该细胞在固定化后其最适反应温度(55℃)和最适pH(8.0)均没有显著变化,而固定化细胞的热稳定性提高,60℃保存12h后酶活没有损失;并发现补充钙离子有助于增加固定化细胞的机械强度和稳定性,固定化细胞在4℃的冰箱中储藏六周,活性没有明显的下降;重复批式反应6批后,催化剂活性并没有变化.发现在反应时添加异丙醇作为助溶剂,能显著提高固定化细胞酯酶的催化活力和对映选择性;在最佳异丙醇浓度为10％时,酶的比活提高1.6倍,对映选择性选择率(E)由不加助溶剂时的E=54提高至E=94.并对影响酶活性和选择性的机理进行了初步探讨,表明加入助溶剂后,显著改变了固定化细胞催化(R)-对映体的Km和Vmax的值,而对(S)-对映体的影响较小.最后在2升的轴向流搅拌式反应器中实现了消旋环戊烯酮乙酸酯的有效拆分,残余底物(S)-酯和产物(R)-醇的对映体过量值可达89.5％,反应液加入对甲苯磺酰氯磺酰化,并通过水解与立体反转获得光学纯的S构型的醇,总收率为73％,S/R:94/6.
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