论文部分内容阅读
猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是一种影响广泛并且危害严重的猪病病毒,对我国养猪业的正常生产造成了严重的经济损失。因此,对于猪群中的PRRSV的感染情况的了解、发展趋势及防控形势等信息的掌握显得尤为重要。本研究将2015-2017年山东省各地区收集的3526份疑似样品使用PCR方法进行PRRSV抗原检测,同时对收集的12478份血清样品使用ELISA方法进行PRRSV抗体检测,归纳总结该病的发生和流行趋势。检测结果表明,2015-2017年山东省PRRSV抗原阳性率波动较大,PRRSV抗原阳性率分别为40.56%、46.15%、37.24%,且三年内每季度阳性率均在33-50%之间波动;PRRSV抗体一直维持较高水平,阳性率分别为84.39%、86.38%、78.51%,说明山东省猪群的PRRSV疫苗免疫或PRRSV野毒感染十分普遍。通过对山东地区PRRSV感染情况的调查,掌握了该三年内PRRSV的感染情况及变化趋势,显示山东省内的PRRS疫病感染情况平稳的趋势,但仍存在发生疫情的风险,对PRRS的防控具有积极意义。在前期研究中,对PRRSV高致病性毒株感染的MARC-145细胞进行蛋白质组学分析,发现反义通路(antisense pathway)呈显著上调活化,且其中的PSF、p54nrb、Matrin3等antisense pathway关键蛋白呈上调表达。为了探索PSF和p54nrb蛋白对PRRSV在MARC-145细胞的增殖的影响,本研究通过设计PSF、p54nrb和PRRSV N基因的引物,建立荧光定量PCR检测方法,验证了对以上基因的表达量进行定量分析方法的可靠性。通过荧光定量方法可以极大增加检测PSF、p54nrb和PRRSV N基因的准确性和敏感性,提高了PSF、p54nrb和PRRSV N基因的检测水平。为了进一步了解PSF、p54nrb在PRRSV增殖过程中的作用和影响,首先采用RNA干扰技术下调和重组慢病毒技术上调了MARC-145细胞中PSF和p54nrb蛋白表达水平,进而分别检测在上述条件下PRRSV的增殖情况。试验结果表明,MARC-145细胞中PSF和p54nrb蛋白的下调,抑制了PRRSV的增殖,且在以上两种蛋白同时下调表达时增殖作用更加明显;在上调PSF和p54nrb蛋白的各组中,PRRSV的增殖明显高于对照组,且共同上调PSF和p54nrb蛋白对于PRRSV的增加明显。综合分析PSF和p54nrb蛋白的表达对PRRSV的增殖作用的结果,可以说明PSF和p54nrb蛋白的表达有助于PRRSV的增殖,并且在PSF和p54nrb的协同作用下,对PRRSV的增殖作用更加明显。因此,PSF和p54nrb蛋白在PRRSV增殖过程中起到了促进作用,对PSF和p54nrb蛋白的功能研究具有积极意义,对PRRSV的深入研究以及防控提供了参考。