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糖尿病肾脏损伤是糖尿病常见的病理损伤。在糖尿病肾脏损伤的早期,肾小球系膜细胞即发生过度增殖,并引起系膜细胞外基质蛋白大量沉积,肾小球基底膜增厚。同时,肾脏的滤过率降低,出现微量白蛋白尿,最终发展成大量白蛋白尿。系膜细胞外基质蛋白堆积(ECM)是糖尿病肾脏损伤的基础,在糖尿病肾损伤甚至糖尿病肾病的发生中有着决定性作用。高血糖引起的肾脏损伤与炎症和肾脏纤维化关系密切。既往研究结果证实橙皮苷具有抗炎、抑制细胞增殖以及抗氧化的作用。本文在国内外研究现状的基础上,通过体内实验对橙皮苷抗炎抑制肾小球系膜增生,延缓纤维化进程,降低尿微量白蛋白的排泄,防治糖尿病肾损伤的药效及机制进行探究。方法:1 db/db糖尿病小鼠肾损伤的病理模型分析选用老年雄性db/m、db/db小鼠作为实验动物,检测并比较对照组与模型小鼠血浆血糖(GLU),总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),血肌酐(CRE),尿素氮(BUN)指标。解剖、检测并分析实验小鼠肾脏病变程度,病理检测观察肾脏肾小球形态及肾小球系膜增生情况。通过上述实验分析db/db糖尿病小鼠作为糖尿病肾损伤模型的可行性。2橙皮苷通过抗炎、抗纤维化改善db/db糖尿病小鼠肾损伤的药效研究24周龄雄性db/db小鼠,连续灌胃给药橙皮苷(200mg/kg)14周,检测血浆GLU,TC,LDL-C,尿白蛋白(MAIb),尿肌酐(Ucr)含量。进行肾脏H&E染色,检测肾脏组织形态;PAS染色检测肾小球基底膜增厚及系膜细胞增殖情况。RT-PCR检测肾脏FN、IV型胶原(COL-IV)、生长因子(TGF-β 1)基因的表达;免疫组化检测肾脏皮质纤维连接蛋白(FN)阳性表达。RT-PCR检测肾脏F4/80、肿瘤坏死因子(TNF-a)、白细胞介素-6(IL-6)基因的表达;免疫荧光检测肾脏巨噬细胞标记抗原F4/80阳性表达。通过上述实验方法,我们对橙皮苷抑制肾小球系膜细胞增殖,抑制肾小球基底膜增厚,降低尿微量白蛋白的药效进行分析,探讨橙皮苷改善肾脏病理改变的药效。结果:1 db/db糖尿病小鼠表现出肾小球系膜细胞增生的肾损伤疾病特征db/db糖尿病小鼠肾脏病理检测结果表明,db/db糖尿病小鼠肾小球明显肥大,肾小球基底膜增厚明显,胶原沉积,具有早期肾脏损伤的病理特点。同时,血液生化指标检测显示其CRE以及BUN并未显著升高,表明db/db糖尿病小鼠尚未表现出糖尿病肾脏病滤过性降低状态。2橙皮苷显著改善db/db糖尿病小鼠肾脏损伤2.1肾脏H&E染色显示,橙皮苷改善db/db糖尿病小鼠肾小球毛细血管网结构的完整性。PAS染色显示橙皮苷能明显抑制db/db糖尿病小鼠肾小球基底膜增厚以及系膜增生的状况。一方面,橙皮苷下调db/db糖尿病模型小鼠肾脏TGF-β 1、COL-IV、FN基因的表达;免疫组化结果显示橙皮苷能显著降低小鼠肾小球FNp阳性表达量。上述实验结果表明橙皮苷通过下调纤维化相关基因的表达降低FN的表达量达到延缓db/db糖尿病模型小鼠肾小球硬化的进程。另一方面,橙皮苷下调db/db糖尿病模型小鼠肾脏F4/80、TNF-a、IL-6基因的表达;免疫荧光结果显示橙皮苷能显著降低肾小球F4/80阳性表达,抑制巨噬细胞对肾脏的浸润,抑制肾脏炎症反应诱发的系膜细胞外基质堆积以及炎症对肾脏的进一步损伤,最终延缓肾脏损伤的进程。2.2橙皮苷降低db/db糖尿病小鼠尿微量白蛋白的排泄,改善肾脏滤过功能。对db/db糖尿病小鼠血浆血糖,总胆固醇以及低密度脂蛋白胆固醇均无明显改善作用。结论:橙皮苷具有降低db/db糖尿病小鼠尿微量白蛋白的排泄,改善肾脏滤过功能的药效。橙皮苷具有抑制db/db糖尿病小鼠肾小球基底膜增厚,减少ECM的堆积,延缓肾小球纤维化的进程的功效;作用机制一方面与其抗炎作用,降低巨噬细胞的浸润,达到减少系膜基质的堆积的作用有关;另一方面与其能抑制增殖,抗肾脏纤维化作用有关。