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原始生殖细胞（Primordial germ cells, PGCs）是多细胞生物体中生殖细胞的祖先,同时也是研究细胞迁移的一个重要的模型。在果蝇、线虫和小鼠等物种中,nanos在PGCs迁移过程中发挥作用,干涉该基因后,PGCs的迁移不正常。尽管Nanos蛋白在脊椎动物和无脊椎动物的PGCs的迁移中起着举足轻重的作用,然而在斑马鱼中,Nanos如何调节PCGs的迁移的分子机制目前还不清楚。为了探讨这一问题,我们以全长的Nanos为诱饵蛋白,通过酵母双杂交系统筛选了一个新的与Nanos相互作用的蛋白,即肌球蛋白轻链2（Myosin light chain II, Mylz2）; Nanos的锌指结构域和C末端的14个氨基酸残基是Nanos-Mylz2相互作用所必需,缺少这两个部分中的任何一个,Nanos都不能与Mylz2相互作用。采用免疫共沉淀和GST pull-down方法,在体内、外证明了Nanos蛋白与Mylz2蛋白能形成一个稳定的复合体。用Mylz2磷酸化的抗体检测,进一步证明了Nanos在人的293T细胞中下调Mylz2蛋白的磷酸化。结果分析Nanos可能通过调控Mylz2的磷酸化来调节斑马鱼PGCs的发育和迁移。Pumilio和Nanos相互作用最早在果蝇中发现,其功能是调控胚胎的背、腹轴形成。随后研究同样发现,人的Pumilio2与Nanos的同源蛋白Nanos 1相互作用,在生殖细胞的发育和维持中发挥作用。在斑马鱼中,pumilio2的研究未见报道。本文通过序列比对,在斑马鱼EST数据库中,发现了一个与pumilio2同源的EST序列。采用3’和5’末端快速扩增cDNA （RACE）方法,从斑马鱼卵巢中获得了该基因的cDNA;通过测序和分析,该基因与pumilio2同源,因此命名为pum-like。斑马鱼pum-like的cDNA含有3861个碱基,编码1106个氨基酸,通过与斑马鱼基因组数据库比对,发现其定位于第25号染色体上,含有21个外显子和20个内含子。同时将斑马鱼pum-like与人、果蝇等物种pumilio基因进行比对构建进化树,结果表明,pum-like与其他物种pumilio2的同源性高于pumiliol。Pum-like的C端含有pumilio基因家族的5个PUF （Pumilio-family RNA binding repeat）结构域。免疫组织化学显示,Pum-like在卵母细胞中进行表达。整胚原位杂交结果证明,pum-like mRNA在2细胞和4细胞的分裂沟中表达,随着胚胎发育,其mRNA主要集中在脑和神经管中。因此,我们推测pum-like可能参与早期胚胎的细胞分裂,并与神经系统的发育和形成有关。卵黄膜是位于卵母细胞外的一层膜结构,在动物的受精和胚胎发育过程中起着十分重要的作用。通过NCBI的数据库和电子差减杂交的方法,在GeneBank斑马鱼卵巢的cDNA文库中获得一条EST序列（XM001340234.1）；利用其EST序列,进行3’、5’RACE,获得该基因的cDNA全长；通过PCR和测序验证该基因的cDNA全长为2720bp,它编码761个氨基酸。通过蛋白比对,发现该蛋白与已知的卵黄膜蛋白没有同源性,因此我们认为它是一个新的卵黄膜蛋白,命名为斑马鱼卵黄膜蛋白zvep （zebrafish vitelline envelope protein）。通过RT-PCR和western blot检测,zvep在卵巢和脑中表达,在其他组织中不表达。采用组织原位杂交和免疫组织化学证明zvep mRNA在卵母细胞的Ⅰ期,Ⅱ期,Ⅲ期转录,蛋白在Ⅲ期卵母细胞的卵黄膜上特异性的表达（阳性信号为2条细线）。以上结果表明,ZVEP在早期卵母细胞中合成,是卵黄膜中的一个新成员,在卵黄膜形成过程中发挥了重要作用。